做pcr,如何確定最佳退火及延伸的時間和溫度?

數(shù)學(xué)人氣：309 ℃時間：2020-02-06 02:56:43

優(yōu)質(zhì)解答

延伸一般都是72° 時間是根據(jù)酶的種類和片段長度決定的
退火溫度根據(jù)引物來決定一般先用55° 不行的話再往下降額，書上都這么寫。但是怎么根據(jù)情況來決定呢？每次都覺得摸不著頭腦。一般的taq酶是一分鐘1kb別的酶可以看看說明書是什么速度然后看你片段多大就可以算出延伸時間了啊別的沒啥摸不著頭腦的吧你們現(xiàn)在用的DNA模板，是什么來源？還經(jīng)常組織塊提取嗎？不同實驗室差別很大好不好我們主要用細胞系的cDNA