葉綠素含有2種呀,請(qǐng)看下面的
葉綠素a在645nm和663nm 處均有吸收,在645nm處吸光系數(shù)較小,為16.75,在663nm 處較大,為82.04；葉綠素b 在645nm和663nm 處亦都有吸收,但在645nm處吸光系數(shù)較大,為45.60,在663nm 處較小,為9.27.由此可知：葉綠素a的吸收峰值出現(xiàn)在663nm 處,該吸收曲線延伸到645nm處,在此波長(zhǎng)處的吸收系數(shù)不如在663 nm 處大,因此在計(jì)算公式中求算葉綠素a的含量時(shí),需扣除葉綠素b在663nm和645nm 處的吸光度值,再進(jìn)行計(jì)算.
標(biāo)準(zhǔn)分析方法要求,葉綠體色素提取液不可渾濁,在710nm或750nm波長(zhǎng)下測(cè)量吸光度,其值應(yīng)小于葉綠素a吸收峰的吸光度值的5％,否則應(yīng)重新過(guò)濾.假定樣品在663nm處的吸光度值為0.03,則在750nm處的吸光度值不得大于0.0015,對(duì)試液的清澈程度要求很高,測(cè)量710nm或750nm的目的是避免懸浮物質(zhì)的干擾,一般測(cè)量水中的渾濁度所采用的波長(zhǎng)為680nm,為避免在680nm處仍有葉綠素a產(chǎn)生的吸收值,故將測(cè)量渾濁度的波長(zhǎng)選在710nm以上.在計(jì)算公式中,凡參與計(jì)算的各吸光度值都應(yīng)減去710nm處的吸光度值,以扣除懸浮物質(zhì)的干擾.
采用分光光度法測(cè)定葉綠素含量,對(duì)測(cè)量?jī)x器分光光度計(jì)的波長(zhǎng)精確度要求較高.如果波長(zhǎng)與原吸收峰波長(zhǎng)相差1nm,則葉綠素a的測(cè)定誤差為2％,葉綠素b為19％,使用前必須對(duì)分光光度計(jì)的波長(zhǎng)進(jìn)行校正.校正方法除按儀器說(shuō)明書(shū)外,還應(yīng)以純的葉綠素a和b來(lái)校正.