葉綠素含有2種呀,請看下面的
葉綠素a在645nm和663nm 處均有吸收,在645nm處吸光系數較小,為16.75,在663nm 處較大,為82.04；葉綠素b 在645nm和663nm 處亦都有吸收,但在645nm處吸光系數較大,為45.60,在663nm 處較小,為9.27.由此可知：葉綠素a的吸收峰值出現在663nm 處,該吸收曲線延伸到645nm處,在此波長處的吸收系數不如在663 nm 處大,因此在計算公式中求算葉綠素a的含量時,需扣除葉綠素b在663nm和645nm 處的吸光度值,再進行計算.
標準分析方法要求,葉綠體色素提取液不可渾濁,在710nm或750nm波長下測量吸光度,其值應小于葉綠素a吸收峰的吸光度值的5％,否則應重新過濾.假定樣品在663nm處的吸光度值為0.03,則在750nm處的吸光度值不得大于0.0015,對試液的清澈程度要求很高,測量710nm或750nm的目的是避免懸浮物質的干擾,一般測量水中的渾濁度所采用的波長為680nm,為避免在680nm處仍有葉綠素a產生的吸收值,故將測量渾濁度的波長選在710nm以上.在計算公式中,凡參與計算的各吸光度值都應減去710nm處的吸光度值,以扣除懸浮物質的干擾.
采用分光光度法測定葉綠素含量,對測量儀器分光光度計的波長精確度要求較高.如果波長與原吸收峰波長相差1nm,則葉綠素a的測定誤差為2％,葉綠素b為19％,使用前必須對分光光度計的波長進行校正.校正方法除按儀器說明書外,還應以純的葉綠素a和b來校正.