中藥化學成分的預試驗
系統(tǒng)預試法——應用一些簡單的定性試驗,對中藥中所含各類化學成分作全面檢查.
單項預試法——根據需要,有重點的檢查某類成分或某藥效成分.
方法：試管反應+薄層層析檢查
中草藥主要來源于植物.植物的化學成分較復雜,有些成分是植物所共有的,如纖維素、蛋白質、油脂、淀粉、糖類、色素等.有些成分僅是某些植物所特有的,如生物堿類、甙類、揮發(fā)油、有機酸、鞣質等.
各類化學成分均具有一定的特性,一般可由藥材的外觀、色、嗅、味等作為初步檢查判斷的手段之一.如藥材樣品折斷后,斷面不油點或擠壓后有油跡者,多含油脂或揮發(fā)油；有粉層的多含淀粉、糖類；嗅之有特殊氣味者,大多含有揮發(fā)油、香豆精、內酯；有甜奈者多含糖類；味若者大多含生物堿、甙類、苦味質；味酸者含有有機酸；味澀者多含有鞣質等等.
中草藥所含化學成分均為多類的混合物,分析時常?；ハ喔蓴_,不易得到正確結果.因此需根據中草藥所含各種化學成分的溶解度、酸堿度、極性等理化性質,再用各類成分的鑒別反應加以鑒別.
一、 預試溶液的制備
1、 水提取液——糖、多糖、有機酸、皂苷、酚類、鞣質、氨基酸、多肽、蛋白質……
2、 乙醇提取液——酚類、鞣質、有機酸、香豆素、強心苷、黃酮、蒽醌、甾體……
3、 5%HCl-乙醇提取液——生物堿
4、 石油醚提取液——甾體、萜類、脂肪油……
（一）鑒別注意事項
1．根據各灰成分不同性質,選用適宜的溶劑提取,以保證等成分能被提取出來.
2．檢品提取液的濃度應足以達到各該反應的靈敏度.
3．檢品提取液的酸堿度（pH）值應不致影響鑒別反應中所需要的pH值.相差甚大時應事先調節(jié).
4．提取液較深時,常易影響觀察鑒別反應的效果,此時可適當稀釋,或進一步提純.
5．鑒別反應時應注意防止多類成分的相互干擾,以免出現(xiàn)假陽性,或顏色不正等情況.最好在化學鑒別的同時,做空白試驗和對照試驗（用已知含某類成分的中草藥或純品做陽性對照）.
6．在鑒別試驗中,如果某一類成分的幾個鑒別反應結果不一致時（即有的呈陽性反應,有的呈陰性）則應進行全面分析.首先應注意呈陽性反應的試驗是否屬于該類成分的專一反應,否則應檢查其他類成分能否產生該反應,從多方面加以判斷.但也應注意,某些反應只能對某一類成分中的某個化學基團呈性反應,如檢查黃酮類的鹽酸――鎂粉試驗,它只對黃酮類中的羥基黃酮類（黃酮醇類）反應明顯,其余類的黃酮類則不甚明顯,但也不能輕易否定不是黃酮類,為了避免孤立和片面的下結論,一定要全面考慮綜合分析.
中草藥化學成分一般鑒別試驗屯只是一個初步判斷,最后確證尚需進一步提純,以鑒定后才能予以肯定.
（二）鑒別方法
1、 氨基酸、多肽、蛋白質
（1）加熱沉淀試驗：加熱煮沸 →混濁或沉淀 （蛋白質）
+5%H2SO4（不加熱）→混濁或沉淀
（2）雙縮脲反應：+40%NaOH,1%CuSO4 →紫色、紅色或紫紅色（多肽、蛋白質）
（3）茚三酮反應：+0.2%茚三酮試液 →藍或藍紫色（氨基酸、多肽、蛋白質）
（4）吲哚醌反應：+吲哚醌試液 →各種顏色（氨基酸）
（5）Millon反應：+Hg,H2NO2 →紅色（蛋白質分子中有酪氨酸組成）
（6）Hopkins-Cole反應：+乙醛酸,濃硫酸 →各色（蛋白質分子中有色氨酸組成）
（7）氨基酸的薄層層析檢查：吸附劑——硅膠G
展開劑—— n-BuOH,n-BuOH：HAc：H2O
顯色劑——0.25%茚三酮試液 →紫紅色斑點
（1）加熱或礦酸試驗：取檢品的水溶液1ml于試管中,加熱至沸或加5％鹽酸,如發(fā)生混濁或有沉淀示含有水溶性蛋白質.
（2）縮二脲試驗：取檢品的水溶液1ml,加10％氧化鈉溶液2滴,充分搖勻,逐漸加入硫酸銅試液,隨加搖勻,注意觀察,如呈現(xiàn)紫色或紫紅色示可能含有蛋白質和氨基酸.
凡蛋白質結構中含有兩個或兩個以上肽鍵（－CONH－）者均有此反應,能在堿性溶液中與Cu2+生成仙絡合物,呈現(xiàn)一系列的顏色反應,二肽呈藍色,三肽呈紫色,加肽以上呈紅色,肽鍵越多顏色越紅.
（3）茚三酮試驗,取檢品的水溶液1ml,加入茚三酮試液2－3滴,加熱煮沸4－5分鐘,待其冷卻,呈現(xiàn)紅色棕色或藍紫色（蛋白質、胨類、肽類及氨基酸）.
氨基酸與茚三酮的水合作物作用,氨其酸氧化成醛、氨和二氧化碳,而茚三酮被還原成仲醇,與所后成的氨及另一分子茚三酮縮合生成有藍紫色的化合物.
【注】①茚三酮試劑主要是多肽和氨基酸的顯色劑,反應在1小時內穩(wěn)定.試劑溶液pH值以5－7為宜,必要時可加吡啶數滴或醋酸鈉調整. ②此反應非常靈敏,但有個別氨基酸不能呈紫色,而呈黃色,如脯氨酸.
（4）氨基酸薄層層析檢出反應：
①吸附劑：硅膠G.
②展開劑：（1）正丁醇：水（1：1）（2）正丁醇：醋酸：水（4：1：5）
③顯色劑：0.5％茚三酮丙酮溶液,噴霧后于1100烘箱放置5分鐘,顯藍紫允或紫色.
2、 皂苷
（1）泡末試驗：振搖 →大量持續(xù)性泡末
+0.1M HCl 二管泡末高度相同（三萜皂苷）
+0.1M NaOH 堿管高于酸管（甾體皂苷）
（2）溶血試驗：+2%紅血球懸浮液 →溶血
（3）Lieberman—Burchard反應：+醋酐-濃硫酸—— 紫紅色（三萜皂苷）
黃-紅-紫-污綠（甾體皂苷）
（1）泡沫試驗：取檢品的水溶液2ml于帶塞試管中,用力振搖3分鐘,即產生持久性蜂窩狀泡沫（維持10分鐘以上）,且泡沫量不少于液體體積的1／3.
【注】常用的增溶劑吐溫、司盤,振搖時均能產生持久性泡沫,要注意區(qū)別.
（2）溶血試驗：取試管4支,分別加入濾液0.25、0.5、0.75 ml,然后依次分別加入生理鹽水2.25、2.0、1.75、1.5 ml,使每一個試管中的溶液都成為2.5ml, 再將各試管加入2％的血細胞懸液2.5ml,振搖均勻后,同置于370水浴或25－270的室溫中注意觀察溶血情況,一般觀察3小時即可,或先滴紅細胞于顯微鏡下,然后滴加檢液看血細胞是否消失.如有溶血現(xiàn)象示正反應.
【注】①鞣質對血紅細胞有凝集作用,干擾溶血試驗的觀察,應事先除去（可用取勝酰胺粉吸附或用明膠沉淀）. ②檢液應為中性溶液.
（3）醋酐濃硫酸試驗（Liebrmann Burchard反應）取檢品的水溶液置蒸發(fā)皿中,于水浴上蒸干,殘渣加入少量冰醋酸使溶解,再加入醋酐濃硫酸（19：1）試液,呈現(xiàn)紅紫色并變成污色綠色（甾類、三萜類成分或皂甙）
（4）區(qū)別甾體皂甙和三萜皂甙：取帶塞試管兩支,各盛檢品的水溶解1 ml,1支加0.1N鹽酸溶液2ml,另一支加0.1N氫氧化鈉溶液2ml用力振搖1分鐘（需左右手交替振搖各半分鐘）,觀察兩管泡沫的多少,若兩管泡沫體積相同或酸管多,示含三萜式皂甙；若加堿管泡沫多于加酸管示含甾示含甾體皂甙.
三萜皂甙為酸性皂甙在酸性水溶液中形成較穩(wěn)定的泡沫；甾體皂甙為中性皂甙在堿笥溶液中能形成較穩(wěn)定的泡沫.
濃硫酸、高氯酸、高氯酸-香草醛、濃硫酸-香草醛等的顯色原理主要是使羧基脫水,增加雙鍵結構,再經雙鍵位移,雙分子縮合等反應生成共軛雙鍵系統(tǒng),又在酸作用下形成陽碳離子鹽而顯色
3、 糖和苷
（1）斐林試劑：+硫酸銅、酒石酸鉀鈉 —— 磚紅色沉淀（還原糖）
（—）+1%HCl +NaOH 沉淀（苷元）
△30min 上清液（+）（多糖、苷）
（2）Molish反應：+α-萘酚-濃硫酸 →紫紅色環(huán)
（3）銀鏡反應：+0.1N硝酸銀、5N氨水 →銀褐色（還原糖）
（4）薄層層析檢查：：吸附劑——硅膠G或纖維素
展開劑—— n-BuOH：Pd：H2O；15%HAc
顯色劑—— 苯胺-鄰苯二甲酸
（1）堿性酒石酸銅試液：取檢品的水溶液1－2ml（如為醇溶液須將醇蒸發(fā)除去）,加入堿笥酒石酸銅試液1ml,于沸水浴上加熱5分鐘,產生棕紅色或磚紅色氧化亞銅沉淀,示有還原糖.
還原糖能使二價銅鹽（藍色）還原成氧化亞銅,醛糖的醛基氧化成羧基：
【注】①如檢液呈酸性,應先堿化. ②此反應所產生的沉淀由于條件不同,其顏色也不同,質點上的呈黃色,質點大的呈紅色.有保持性膠體存在時,也常產生黃色沉淀. ③職樣品中含有其他醛、酮及還原較強的其他成分,或中劃藥制劑中附加的抗氧劑、；葡萄糖等均可顯陽性反應.
（2）α萘酚試驗（Molisch紫環(huán)反應）：取檢品的水溶液1ml,加5％萘酚試液數滴振搖后,沿管壁滴入5－6滴濃硫酸,使成兩液層,待2－3分鐘后,兩層液面出現(xiàn)紫紅色環(huán)（糖、多糖或甙類）.
多糖類遇濃硫酸被水解成單糖,單糖被濃硫酸脫水閉環(huán),形成糠醛類化合物,在濃硫酸存在下與α萘酚發(fā)生酚醛縮合反應,生成紫紅色縮合物.
【注】①甙的分子結構中含有糖基,一般屬于單糖類,如葡萄糖,鼠李糖、半乳糖,但也有含二分子糖（雙糖）或多分子糖（多糖）.在上述反應條件下,甙被水解成單糖,因此甙萘酚試驗,系分子中糖部分的反應. ②由于此反應較為靈敏,如有微量濾紙纖維或中草藥粉末存在于溶液中,都能產生上述反應.故濾過時應加注意.
（3）多糖的確證試驗：取檢品的水溶液5ml于水蒸發(fā)至干,加入1ml蒸餾水,再加入乙醇5ml,如出現(xiàn)沉淀,濾過收集后用少量熱乙醇洗滌,再將沉淀物溶于3ml蒸餾水中,做下例試驗.
①碘試驗：取檢品的不溶液1ml,加碘試液1滴,觀察顏色變化,如呈藍黑色為地衣糖；紫黑色為糊精；藍色加熱消失,冷后藍色再現(xiàn)為淀粉.
②多糖水取檢品的水溶液1ml,加入稀鹽酸5滴,置沸水浴中加熱10－15分鐘,然后用10％氫氧化鈉液中和至中性,再加新配制的堿性酒石酸銅試淮4滴,另取檢液1ml,不加酸水解直接加入上述試液4滴,兩管同置水浴上煮沸5－6分鐘.如果水解后生成棕紅色常常物的量比未經水解的多,則示有多糖.
多糖水解后產生單糖,利用單糖的還原性,使銅離子還原成氧化亞銅.
4、 酚類和鞣質
（1）FeCl3試劑：+1%FeCl3試液 →藍、暗綠或藍紫色
（2）三氯化鐵-鐵氰化鉀試劑：噴灑→藍色斑點
（3）香草醛-鹽酸試劑：噴灑 →紅色（間苯二酚、間苯三酚）
（4）重氮鹽試劑：+對硝基苯胺、亞硝酸鈉 →紅色
（5）薄層層析檢查：吸附劑——硅膠G或纖維素
展開劑—— n-BuOH：HAc：H2O；15%HAc
顯色劑——1% FeCl3試液
1%三氯化鐵-1%鐵氰化鉀試液 →藍、綠或黑色
鞣質與酚類的區(qū)別：+明膠 —— 沉淀
上清液 +1%FeCl3試液 →藍、暗綠或藍紫色
（1）三氯化鐵試驗：取檢品的水溶液1ml,加三氯化鐵試液1－2滴,呈現(xiàn)綠色、污綠色、藍黑色或暗紫色（可水解鞣質顯藍一藍黑色,縮合鞣顯綠色一污綠色）.
鞣質均是多羥基酚的衍生物,即多元酚,能和三價鐵離子發(fā)生顏色反應生成復雜的絡鹽.
【注】此反應如遇有礦酸或有機酸、醋酸鹽等存在,能阻礙顏色的生成.硝基酚類對三氯化鐵試劑無明顯反應.
（2）明膠試驗：取檢品的水溶液1ml,加氯化鈉明溶液2－3滴,即生成白色沉淀物.
鞣質有凝固蛋白的性能.
（3）溴試驗：取檢品的水溶液1ml,加溴試液1－2滴,生成白色或沉淀物,示可能含有酚或兒茶酚鞣質.
【注】過多的溴會阻礙鞣質的沉淀,因此溴水不宜多加.
（4）香草醛一酸試驗：取檢品的水溶液點于濾紙片上,干后,噴霧或滴加香草醛一鹽酸試液,呈現(xiàn)紅色斑點（多元酚類物質）.
（5）鞣質、酚類薄層層析檢出反應：
①吸附劑：聚酰胺；硅膠；硅膠；石膏：水（5：1：7）調成狀,涂成薄板,1050烘干45分鐘.
②展開劑：乙醇：醋酸（100：2）；正丁醇：乙酸乙酯：水（5：4：1）；苯：甲醇（95：5）.
③顯色劑：10％三氯化鐵溶液；1％三氯化鐵乙醇溶液與1％鐵氰化鉀水溶液（1：1）顯藍一紫色斑點.
5．黃酮及其甙類
（1）鹽酸-鎂粉反應：+HCl-Mg →紅色
（2）三氯化鋁反應：+AlCl3 →黃色
（3）濃氨水反應：+NH3 →亮黃或橙色
（4）薄層層析檢查：吸附劑——聚酰胺或硅膠G
（1）鹽酸一鎂（或鋅）粉試驗：取檢品的乙醇溶液1ml,加放少量鎂粉（或鋅粉）,然后加濃鹽酸4－5滴,置沸水浴中加熱2－3分鐘,如出現(xiàn)紅色示有游離黃酮類或黃酮甙（以同法不加鎂或粉做一對照,如兩管都顯紅色則有花色素存在.如繼續(xù)加碳酸試液使成堿笥即變成紫色雙轉變?yōu)樗{色,即證明含花色素）.
黃酮類的乙醇溶液,在鹽酸存在的情況下,能被鎂粉還原,生成花色甙元而呈現(xiàn)紅色或紫色反應（個別為淡黃色、橙色、紫色或藍色）.這是由于酮類化合物分子中含有一個堿性氧原子,致能溶于稀酸中被還原成帶四價的氧原子即鋅鹽.本法是鑒別黃酮類的一個反應.但花色素本身在酸性下（不需加鎂粉）呈紅色,應加以區(qū)別.
【注】①此反慶僅在化學結構中,第三位上帶羥基的酮醇類顯色較明顯,而其它黃酮烷酮類均不甚明顯.因此試驗呈陰性反慶是不能做出否定的結論,尚需結合其他實驗再做結論. ②試驗應在醇中進行,水分多會影響顏色的生成.此反慶較慢,有時需置水浴上加熱,以促使反應的進行.
（2）熒光試驗：
①三氯化鋁試驗：取檢品的乙醇溶液點于濾紙片上（干后再點1次,使其濃度庥中）,干后,噴霧1％三氯化鋁乙醇試液,在紫外光燈下觀察,呈現(xiàn)黃色、綠色、橙色等熒光為黃酮類；呈現(xiàn)天藍色或黃綠色；熒光,則為二氫黃酮類.這是區(qū)別二氫黃酮類化合物的一種鑒別反應.
②硼酸丙酮枸櫞酸丙酮試驗：取檢品的乙醇溶液1ml,在沸水浴上蒸干加入飽和硼酸丙酮溶液及10％枸櫞酸丙酮溶液各0.5ml,蒸去丙酮后,在紫外光燈下觀察,管內呈現(xiàn)強烈的綠色熒光（黃酮或其甙類）.
（3）堿液試驗：取檢品的乙醇溶液點于濾紙片上（干后,再點一次,使其溶液集中）,干后,噴1％碳酸鈉溶液或在氨蒸氣中熏幾分鐘,呈現(xiàn)亮黃、綠或橙黃色.如將氨氣熏過的濾紙露置空氣中,顏色逐漸裉去而變?yōu)樵械念伾S酮或其甙類）.
5、 生物堿
（1）沉淀反應——碘化汞鉀試劑 →白色或淺黃色沉淀
碘化鉍鉀試劑 →橘紅色沉淀
碘—碘化鉀試劑 →淺棕或暗棕色沉淀
硅鎢酸試劑 →淺黃或黃棕色沉淀
磷鎢酸試劑 →淺黃色沉淀
磷鉬酸試劑 →白色或淡黃色沉淀
苦味酸試劑 →黃色結晶或非結晶形沉淀
鞣酸試劑 →棕黃色沉淀
氯化金試劑 →黃色結晶
氯化鉑試劑 →白色結晶
雷氏銨鹽 →紅色無定形沉淀
（2）薄層層析檢查：吸附劑——堿性氧化鋁（Ⅲ級,干法鋪板）
硅膠G（稀堿濕法鋪板）
展開劑——氯仿：甲醇
顯色——UV；碘化鉍鉀
6、 有機酸
（1）PH試紙檢查
（2）溴酚蘭試液：噴灑→藍色背景黃色斑點
（3）薄層層析檢查：吸附劑——硅膠G或酸性氧化鋁
展開劑—— C6H6：EtOH
顯色劑——0.1%溴酚蘭試液→黃色
7、甾體
（1）Lieberman—Burchard反應：+醋酐-濃硫酸 →黃-紅-紫-污綠
（2）氯仿-濃硫酸反應：+氯仿-濃硫酸 氯仿層→紅或青色
硫酸層→綠色熒光
（3）五氯化銻或三氯化銻反應：+SbCl3或SbCl5 →紅色
（4）薄層層析檢查：吸附劑——中性氧化鋁或硅膠G
展開劑—— C6H6-MeOH；CHCl3-MeOH
顯色劑—— 10%磷鉬酸 →藍-藍紫色
5%三氯化銻試液 →紅、棕紅或綠色
9、香豆素、內酯
（1）開閉環(huán)反應：+1%NaOH→澄清 +2%HCl→混濁
（2）異羥污酸鐵反應：+7%鹽酸羥胺、10%KOH △ +稀HCl、1%FeCl3 →紅色
（3）重氮鹽試劑：+對硝基苯胺、亞硝酸鈉 →紅色
（4）薄層層析檢查：吸附劑——酸性硅膠G或硅膠G 或酸性氧化鋁
展開劑—— 甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5：4：1）
顯色劑—— UV→藍色熒光
異羥污酸鐵試液 →紅色
10、強心苷
（1）Kedde試劑：+3,5-二硝基苯甲酸試液 →紫紅色
（2）Baljet試劑：+堿性苦味酸試液 →橙或橙紅色
（3）Legal試劑：+亞硝酰鐵氰化鈉試液 →紫紅色
（4）K-K反應：+FeCl3/冰HAc、濃H2SO4→ 上層綠~藍色 （2-去氧糖）
界面紅棕色
（5）薄層層析檢查：吸附劑——硅膠G 或中性氧化鋁
展開劑—— n-BuOH：HAc：H2O（4：1：5）
顯色劑—— 堿性3,5-二硝基苯甲酸試液→紫紅色
堿性苦味酸試液 →橙紅色
11、蒽醌
（1）堿液反應：+10%NaOH →紅色 +H2O2 →紅色不褪 +H+ →紅色褪去
（2）醋酸鎂反應：+1%MgAc2 →紅色
（3）薄層層析檢查：吸附劑——硅膠G
展開劑——Pet：EtOAc
顯色劑—— UV→黃色熒光
5%NaOH →紅色
12、揮發(fā)油、油脂
（1）油斑檢查：油斑揮發(fā) →揮發(fā)油； 油斑不消失→油脂或類脂
（2）磷鉬酸反應：噴灑5%磷鉬酸試液 →藍色（油脂、三萜、甾醇）
最后重點提醒：以上各試劑的配制方法最好參照藥典來配制,原因一是上面寫得很詳細,二是藥典中有個規(guī)定,藥典上配制的溶液要是要用到乙醇的,如果沒有指定用無水乙醇,一般是要用95%的乙醇的.
另外附一個試劑的配法：
氯化鈉明膠試劑：（兩者都是固體,剛開始我還真不知道怎樣配,后來在藥典才發(fā)現(xiàn)配方）2g氯化鈉和1g明膠,再加上100g水,要求是現(xiàn)配的!