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  • 考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)的公式是什么?

    考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)的公式是什么?
    生物人氣:216 ℃時(shí)間:2020-03-27 18:10:09
    優(yōu)質(zhì)解答
    公式是根據(jù)測(cè)量結(jié)果自己算出來(lái)的:
    考馬斯亮藍(lán)比色法是由Bradford等人建立 的1種測(cè)定微量蛋白質(zhì)的方法L5],考馬斯亮藍(lán)所含疏 水基團(tuán)在酸性條件下與蛋白質(zhì)的疏水微區(qū)具有親和力,通過(guò)疏水作用與蛋白質(zhì)相結(jié)合,形成的藍(lán)色蛋白質(zhì)一染料復(fù)合物,在595 nm處有最大吸光度,復(fù)合物1 h內(nèi)保持穩(wěn)定.在一定的蛋白質(zhì)濃度范圍內(nèi),蛋白質(zhì)一染料復(fù)合物在595nm處的吸光度與蛋白質(zhì)含量成正比,因此可用于蛋白質(zhì)含量的測(cè)定.
    測(cè)定時(shí),用同一種標(biāo)準(zhǔn)蛋白(自己選,如牛血清白蛋白,所選的標(biāo)準(zhǔn)蛋白最好是純化的待測(cè)蛋白——但這是理想狀態(tài),一般選擇氨基酸構(gòu)成與待測(cè)蛋白相近的標(biāo)準(zhǔn)蛋白.否則將影響測(cè)定結(jié)果)配制成覆蓋待測(cè)樣品蛋白濃度的標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液,然后加等量考馬斯亮藍(lán)G-250,混勻后用紫外分光光度計(jì)測(cè)定個(gè)標(biāo)準(zhǔn)蛋白樣品的吸光值.并測(cè)定待測(cè)樣品(可稀釋成幾個(gè)不同濃度的樣品同時(shí)測(cè))的吸光值.所有樣品重復(fù)測(cè)三次.
    最后以蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo),以吸光度為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.計(jì)算出回歸方程.如Y=aX+b
    讓后把待測(cè)樣品的吸光值代入回歸方程,算出待測(cè)樣品濃度.
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