TLC薄層色譜法.
將供試液及供試液a、對照液b各5ul分別點于薄層板上,并將點好的薄層板置于層析室中放置15分鐘,層析中應(yīng)由8體積濃氨、8體積甲醇和84體積乙酸乙酯所組成的展開劑的蒸汽所飽和,并且立即用同樣的混合溶劑展開至約15cm.用冷空氣流干燥薄層板,置于碘蒸氣中顯色直至得到對照液的主斑點,在254nm處用紫外光檢測.
以上是原文省去了供試液等的制備及最后結(jié)果的判斷.
我有以下疑問望各位前輩給予指點：
1、“并將點好的薄層板置于層析室中放置15分鐘”,這個15分鐘是怎么樣放置的?層析室中是要放展開劑嗎?如果是的話,那不是已經(jīng)開始展開了嗎,何必下面又來句同樣的混合溶劑展開15cm呢?這點到底應(yīng)該怎么操作呢?我以前做其它樣品的時候是點完樣之后直接展開15cm的,沒有要求放置15分鐘.
2、“層析中應(yīng)由8體積濃氨、8體積甲醇和84體積乙酸乙酯所組成的展開劑的蒸汽所飽和”,如果按展開劑8體積濃氨、8體積甲醇和84體積乙酸乙酯所組成的話,展開樣品的時候,豈不是已經(jīng)超過點樣點了嗎?展開劑不是不能夠超過點樣的位置嗎?我是否可以把比例放小?既然能夠放小為何又說8：8：84呢,直接說2：2：21呢?
3、我在沒有放置15分鐘和展開劑按2：2：21得時候,分離效果不是很好,分不開.