阿司匹林含量測定綜述08藥學1班：冉賢飛
阿司匹林片為常用的解熱、鎮(zhèn)痛藥,收載于(中國藥典2000年版)二部.原含量測定方法為酸、堿中和滴定法.目前市場上流通的解熱、鎮(zhèn)痛藥物中,含阿司匹林或以阿司匹林為主藥的較多.除了中國藥典的原含量測定方法以外,針對各個劑型有多種含量測定的方法.如采用高效液相法測定其含量,可消除其他含有酸、堿的物質對其測定的干擾,可更有效的控制制劑的質量.方法操作簡便,專一性強,結果準確.也有用數學模型進行計算的如近紅外漫反射技術,其原理是根據標樣集中樣品的近紅外光譜運用化學計量學方法建立光譜特征值(如吸光度)與待測成分之間的數學關系(簡稱數學模型)

1．阿司匹林及阿司匹林制劑的含量測定
阿司匹林及阿司匹林制劑的含量測定有多種方法,其中包括藥典所載的酸、堿中和滴定法
及紫外分光光度法,高效液相法等.
1．1阿司匹林酸堿滴定法：
直接滴定：方法：取本品0.4g,精密稱定,加中性乙醇20ml,溶解,加酚酞指示液3d,用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/l）滴定.每1ml滴定液相當于18.02mg 的C9H8O4
水解后剩余滴定：方法：取本品1.5g,精密稱定加氫氧化鈉滴定液（0.5mol/l）50.0ml,混合,緩緩煮沸10min,放冷,加酚酞指示液,用硫酸滴定液（0.25mol/l）滴定剩余的氫氧化鈉.
兩步滴定法：取本品10片,精密稱定,研細,精密稱取片粉適量（約相當于阿司匹林）,加中性乙醇20ml,振搖使阿司匹林溶解,加酚酞指示液3d,滴加氫氧化鈉滴定液（0.1mol/l）至溶液顯粉紅色.加定量過量的氫氧化鈉滴定液（0.1mol/l）40ml,置水浴上加熱15min并時時振搖,迅速放冷至室溫,用硫酸滴定液（0.05mol/l）滴定剩余的堿.根據消耗的滴定液體積及滴定度計算含量
1．2阿司匹林制劑的電極法測定
儀器與試劑：電極電位和溶液酸度測試均使用pHs—loC型數字式酸度離子計；參比電極為232型飽和甘汞電極；試劑均為分析純,實驗用水為去離子水經高錳酸鉀處理后蒸餾而得.
電極制備：將載體物質三芐基錫辛酸酯20mgl聚氯乙烯（PVC）0．33g和增塑劑鄰硝基苯基辛醚o．65g溶解于四氫呋喃（THF）3g中,攪拌澄清后將其傾倒于40 mm×40 mm的水平玻璃板上.待THF揮發(fā)完后(約需l 2h)即得到具有彈性的PVC膜.用打孔器切下直徑10 mm的圓片并用含5％PVC的THF溶液粘于PVC電極桿端,放置數小時,晾干后電極桿內充以0.1mol／L的水楊酸鈉溶液作為內參比溶液并以Ag／AgCl絲作為內參比電極導出至離子計.電極使用前需于0.01mol／l水楊酸鈉溶液中浸泡2h進行活化處理.電極及備用膜長期不使用時可洗凈后．置于氮氣氛圍下保存.在此條件保存,電極的各項性能指標至少可于5個月內維持穩(wěn)定.
阿司匹林制劑的分析：待測樣品的處理： 阿司匹林易水解得到水楊酸根離子,且反應定量.因此,通過對水楊酸根離子的測定即可得出樣品中的阿司匹林含量.阿司匹林片(A)和復方阿司匹林片（B）均處理如下：將適量藥品(10片)研制成粉狀,精密稱取1—1．5g．在0.5mol／L NaOH溶液25m1中加熱回流1h后過濾,定容至250 ml.吸取lOm1濾液,用稀硫酸調至pH 5．5,再用PH 5．5的磷酸鹽緩沖液定容至100 mI作為待瀾液.使用所配電極通過標準溶液法和樣品加入法．分別測定藥品A和B經前述處理后所得試樣中的水楊酸根離子濃度,通過換算得出藥劑中阿司匹林的含量
1．3 HPLC法測定阿司匹林片的含量
儀器與試藥 儀器：高效液相色譜儀；CLASS—LC工作站.色譜柱：ODS C18色譜柱(150mm x 4．6mm,填料：Kromasil,粒度：5um). 試藥 阿司匹林對照品,甲醇(色譜純試劑),冰醋酸、鹽酸(分析純試劑).
取本品20片,精密稱定,研細,精密稱取適量(約相當于阿司匹林10mg),置100m1量瓶中,加0．1mol/l鹽酸溶液適量,超聲使阿司匹林溶解,放冷至室溫,加0．1mol/l鹽酸溶液稀釋至刻度,搖勻,濾過,精密量取續(xù)濾液5m1,置25m1量瓶中,加0．1mol/l鹽酸溶液稀釋至刻度,格勻,取20ul注入液相色譜儀,記錄色譜圖.另取阿司匹林對照品適量,加0．1mol/l鹽酸溶液溶解并稀釋制成每l m1中約含阿司匹林20ul的溶液,取20ul同法測定.按外標法以峰面積計算,即得.
1．4動力學光度法測定痕量乙酰水楊酸
原理：碘對Ce4+和As的氧化還原反應有明顯的催化作用,乙酰水楊酸和碘容易發(fā)生取代反應,使碘的濃度降低,導致碘的催化作用減弱,由此建立動力學光度法測定痕量乙配水楊酸的新方法.
儀器和試劑：721型分光光度計；PHS—3C酸度計；超級恒溫水浴.0．01mol/lCe(SO4)2 0．013mol/L AS2O3,5mol/l H2S04 , 5mg/l KI用時稀釋至0．25mg/l ;150mg/l乙酰水楊酸標準溶液用時稀釋至所需濃度；5％醋酸馬錢子堿；實驗用水為二次蒸餾水.
實驗方法:于一系列25m1比色管中準確加入0．25mg/lKI溶液1．0m1,5mol/l H2S04溶液1．25m1,0．013mol/L AS2O3溶液1.0ml,乙酸水楊酸標準溶液(或樣品溶液),加蒸餾水至25m1刻度線.搖勻并放人35土0．1度的水浴中,恒溫后加入0.01mol/l Ce〔S04)2 1.0ml,立即搖勻,迅速放回水浴中.反應10min后,加入0.5mol/l,0.5％的醋酸馬錢子堿終止反應并與Ce4+—顯色,置于沸水浴中煮沸3min,取出冷卻至室溫.用1cm比色皿,在波長520nm處,以蒸餾水為參比,測定吸光度A.
2．以阿司匹林為主藥的含量測定
雖然其成分組成有差異,但大多仍是根據阿司匹林的化學或色譜性質加以分離并測定其含量.
2．1反相高效法相色譜法測定阿司匹林可待因片中阿司匹林含量
儀器和試劑：Hp-1050液相色譜儀及UV檢測器,HP3396積分儀.磷酸可待因對照品、阿司匹林對照品 .甲醇、醋酸鈉、冰醋酸均為分析純試劑,阿司匹林磷酸可待因復方制劑(試制品).
液相色譜條件：色譜柱ODS C18(10mm,300mm×4mm) 流動相：甲醇—0．03mol/L—l醋酸鈉(冰醋酸調pH＝3．5)(1：2．5)；檢測波長：280nm；流速：1ml/min.
測定方法
混合對照品溶液配制 準確稱取在105℃干燥至恒重的磷酸可待因對照品適量.用水溶解,配制成濃度為0.8mol/l的溶液.準確稱取阿司匹林對照品約40ml置10mL容量瓶中.加入甲醇2—3mL,溶解,精密加入上述磷酸可待因溶液1.0mL,用水定容至刻度,搖勻即得.
供試品溶液配制 精確稱取樣品細粉適量(約相當磷酸可待因8mg阿司匹林400mg)置100mL容量瓶中,加入25％甲醇溶液50mL,超聲溶解5min.用25％甲醇溶液稀釋至刻度,格勻.經0.45um微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液為供試品溶液.
測定 精密吸取混合對照品溶液和供試品溶液各10uL,分別注入液相色譜儀中.記錄峰面積.根據混合對照品溶液中磷酸可待因和阿司匹林的峰面積,計算出供試品溶液中二者的含量.
2．2小兒退熱靈片紫外摺合光譜測定
原理：摺曲線分析法是一種數學變換方法(它的數學屬性是一種新的復合導數變換).它根據諧波分析原理,將光譜吸收曲線看作是多個數學分量加權而成.由于它提供的信息量大,可以顯示吸收曲線的細微差異,以減少相似組分的數學相關性,所以在物質定性和混合物定量方面具有明顯的優(yōu)點.
儀器與試藥：UV／VIS W型裙合光譜儀及裙合光譜軟件；阿司匹林(1)對照品(含量99．89％)、苯巴比妥(2)對照品(含量99．92％)和輔料(佳木斯化學制藥廠)；小兒退熱靈片
方法與結果：對照品溶液的配制：分別精密稱取1、2對照品適量,用0．1mol／LNaOH溶液(溶劑)溶解稀釋制成1mg／m1的儲備液.再用溶劑稀釋制成適當濃度的溶液(約120ug／m1,22．0ug／m1,使1和2的吸收度在0.2—0．8),備用.模擬樣品的配制 按原黑龍江地方標準藥品處方比例稱取1、2與適量的輔料混勻后,精密稱取0．2g置小燒杯中,用溶劑溶解并定容至100m1,靜置10min,再取5m1稀釋至250m1.分別吸取16、17、18、19和20m1置各25m1量瓶中,用溶劑定容,得1濃度為20—25ug／m1、2濃度為2．0—2．5ug／m1的模擬樣品溶液(使1和2的吸收度在0．2—1．2),共5份.
樣品測定：取本品12片,精密稱定,研細,精密稱取細粉適量(約相當于10．110g,20．011g),用少量溶劑溶解后定容至50m1.按“2．3”項下方法選定的最佳摺合區(qū)間(245—295nm),經摺合光譜自動采集該區(qū)間的光譜信息,以兩組分定量分析系統(tǒng)軟件進行裙合運算,并計算得含量
2．3近紅外漫反射技術測定精氨酸阿司匹林的含量
原理：近紅外定量分析需要一個待測成分已知的標準樣品集(簡稱標樣集),根據標樣集中樣品的近紅外光譜運用化學計量學方法建立光譜特征值(如吸光度)與待測成分之間的數學關系(簡稱數學模型).當測定未知樣品時,只需測定該樣品的近紅外光譜,然后用已建好的數學模型預測出待測成分的含量.與常規(guī)的光譜定量分析不同之處是,近紅外光譜分析時所用樣品可以不經預處理,通過求解光譜矩陣與待測成分的濃度矩陣來建立數學模型,進行定量.檢測固體樣品一般采用漫反射技術,對于液體樣品的檢測用透射方法.建立數學模型的方法主要有：多元線性回歸、主成分法、偏最小二乘法等.貼算法相對而言是一種較新的多元數據處理技術,它與逐步回歸、主成分回歸的顯著差異在于考慮全譜區(qū)各波長是光譜參數的同時,還兼顧了被分析樣品內部各成分之間的關系,因此在NIR分析中得到廣泛應用.
儀器：Bruker公司VECTOR22/N近紅外光譜儀,帶漫反射光纖探頭波長區(qū)間4000-11000cm-1
樣品: 精氨酸阿司匹林固體粉末含阿司匹林48．0％-53．0％, 蔗糖酯(片劑輔料,作為潤滑劑)
實驗方法：用1／1000扭力天平準確稱取不同比例的精氨酸阿司匹林與蔗糖酯,共10份,分別混合均勻,用壓片機壓片,得到精氨酸阿司匹林含量不同的片劑(以此含量做為精氨酸阿司匹林片的理論含量一真值),每種各100片.從每種100片中隨機選取10片,用儀器的漫反射光纖探頭壓住藥片,每片正反面各測1次,取平均光譜做為樣品光譜.掃描區(qū)間為4000-11000cm-1,分辨率為8cm-1.用Bruker公司Bruker公司quant/2軟件分析,光譜數據采用加性散射校正預處理,以消除藥片表面不同引起的誤差,即可得到測量值.
2．4阿司匹林精氨酸鹽注射液含量測定
儀器與試藥： 儀器 79—l電磁攪拌儀；紫外—可見分光光度計.精氨酸,阿司匹林,其余試劑均為分析純.
標準曲線的繪制：精密稱取阿司匹林結晶250．0 mg,懸浮于250mL蒸餾水中,在40一50度水浴中不斷攪拌至溶解,冷卻后移入500 ml量瓶中,加蒸餾水至刻度,搖勻.精密吸取l,2,3,4,5mL分別置于50 mL量瓶中,加25mL蒸餾水,用o．1mol/LNaOH溶液調節(jié)pH至9一10,在沸水浴中加熱5min,冷卻后,用0.1mol/l鹽酸溶液調節(jié)pH至3.0一4.0,加5滴硫酸鐵銨指示液,再加蒸餾水至刻度,搖勻.在530 nm波長處測定吸收度A.線性回歸得方程.
測定含量：精密稱取阿司匹林精氨酸鹽400．0 mg置l00mL量瓶中,加蒸餾水溶解,稀釋至刻度,搖勻,過濾.取續(xù)濾液5mL,置50 mL量瓶中,在沸水浴中加熱數分鐘,冷卻,加25mL蒸餾水,以下同標準曲線項下處理,在530 nm波長處測定吸收度A,計算阿司匹林精氨酸鹽的含量.阿司匹林精氨酸鹽的含量＝(測定值／稱量值)×loo％,代入數據求得阿司匹林精氨酸鹽的含量.
3．阿司匹林體內藥物分析：
3．1反相高效波相色譜法測定阿司匹林血藥濃度
1 儀器與試藥：Waters2690高效液相色譜儀,配置有996二極管陣列檢測器及Millennium數據處理系統(tǒng)；旋渦混合器(上海青浦滬西儀器廠)；TGL—16高速離心機(上海醫(yī)用儀器廠). 水楊酸、苯甲酸對照品(中國藥品生物制品檢定所)；磷酸為分析純,乙睛為色譜純；水為超純水.
色譜條件：色譜柱為Diamonsil C18柱(4．6mm×250mm,5um),流動相為甲酵—乙睛—0．2％磷酸(18：32：50),檢測波長為237nm,流速為1.0ml／min.
溶液配制： 精密稱取10．10mg水楊酸對照品,用甲酵溶解,并定容至10ml,得到1．010mg／L水楊酸的儲備液,并用甲醇稀釋成不同濃度的系列溶液.精密稱取10．44mg苯甲酸,用甲酵溶解,并定容至10ml,得到1．044mg/l苯甲酸的儲備液.取lml儲備液,用甲醇稀釋至loml,得到104．4ug／ml的內標工作液.
樣品處理與測定：精密量取血清樣品0．5nl,加入內標苯甲酸溶液(104．4ug／m1)50ul,乙睛2ml,旋渦振蕩2min,15000r／min離心5min,取上清夜20ul,在上述色譜條件下進樣,分別記錄內標與樣品的色譜圖與峰面積.按外標法以峰面積計算,即得.
討論
阿司匹林及其制劑有多種分析方法,但有其共同點.HPLC分析中,檢測柱一般多采用C18柱,檢測波長為280左右.滴定法都是根據藥物中含游離羧酸的酸性進行滴定,或水解后用酸回滴.其他以數學模型等方法進行的測量,也都是基于阿司匹林的化學結構和性質.
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