金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基 (RFP) 是青島海博生物公司改良的培養(yǎng)基,用于食品、水、牛奶、冰激凌和肉制品中金黃色葡萄球菌的快速檢測.符合 SN 標(biāo)準(zhǔn)、 GB 標(biāo)準(zhǔn)和 ISO 標(biāo)準(zhǔn),金黃色葡萄球菌顯灰黑色,其外圍有一不透明沉淀環(huán).由于本培養(yǎng)基中已含有免血漿,在 24-48 小時(shí)可以確定結(jié)果,無需進(jìn)行確證試驗(yàn),可以用于金黃色葡萄球菌的計(jì)數(shù)或分離培養(yǎng),是一種很理想的快速檢測培養(yǎng)基.
成份 (g/L)
改良 BP 基礎(chǔ) 48.0
瓊脂 10.0
pH 7.0 ± 0.2 25 ℃
RFP 添加劑：30 瓶 *5ml
此配方可以進(jìn)行改良或增加營養(yǎng)成份以獲得最佳的結(jié)果.
注意
此培養(yǎng)基僅供實(shí)驗(yàn)室使用.
用法
稱 取本品 2.0g 加入 28ml 蒸餾水,121 ℃ 高壓滅菌 15 分鐘.放置 50 -55 ℃ 水浴鍋中 冷至50 -55 ℃ 左右時(shí),加入1 瓶已溶解好的 RFP 添加劑 ( 可在 60 -80 ℃ 溫度下10-20 秒快速溶解 ) ,混勻,樣品可采用傾注法或表面劃線法或涂布法進(jìn)行金黃色葡萄球菌的檢測.
RFP 添加劑的溶打開瓶蓋,加入 5ml 無菌蒸餾水在無菌條件下溶解,注意動(dòng)作不要太劇烈.在 37 ℃ 10 分鐘內(nèi)可以完全溶解 ( 或在 60 -80 ℃ 溫度下10-20 秒快速溶解 ) .
貯存
制備好的平板可保存 2-5 天,應(yīng)避免光線直接照射.干燥培養(yǎng)基應(yīng)放置于陰暗干燥處,保存溫度 2-8 ℃,注意避光保存.
失效
干燥培養(yǎng)基超過保質(zhì)期、結(jié)塊和顏色變化都不能使用.
操作步驟
1、按國家標(biāo)準(zhǔn)、 SN 標(biāo)準(zhǔn)、 ISO 標(biāo)準(zhǔn)或其它方法制備樣品液；
2、取 1ml 適宜稀釋度的樣品液加入無菌平皿中心,每個(gè)稀釋度取 2 個(gè)平皿 ；
3 、傾入 10-15ml 冷至 48 ℃ 左右的 BP 基礎(chǔ)培養(yǎng)基到平皿中,混勻 ；
4 、培養(yǎng)基凝固后,放置培養(yǎng)箱 37 ± 1 ℃ 培養(yǎng) 18-24h ,典型的金黃色葡萄球菌為灰黑色菌落,其外圍有一不透明圈,如果沒有典型菌落出現(xiàn),再培養(yǎng) 18-24 小時(shí)；
5 、計(jì)數(shù)所有外圍有一不透明圈的菌落,無需進(jìn)行確證試驗(yàn).
注意：也可以用涂布法或劃線法.
質(zhì)量控制
1 、外觀
此干燥培養(yǎng)基的粉末均勻,具有良好的流動(dòng)性,呈淡黃色.制備好的平板呈白色半透明固體培養(yǎng)基.
2 、微生物試驗(yàn)
在 36 ± 1 ℃培養(yǎng) 24 28h 小時(shí)：
質(zhì)控菌株 ATCC 生長情況 菌落顏色 不透明環(huán)
單增李氏菌 27853 + 無色 -
金黃色葡萄球菌 25923 +++ 灰黑色 +
表皮葡萄球菌 +++ 灰黑色 -
沙門氏菌 -/+ 無色 -
大腸桿菌 -/+ 無色 -
方法的局限性
本培養(yǎng)基用于直接鑒定金黃色葡萄球菌,如果在 18-24 小時(shí)沒有出現(xiàn)典型菌落,需再培養(yǎng) 18-24 小時(shí).有時(shí)金黃色葡萄球菌不顯灰 黑色 ,但其 外圍有一不透明圈.
典型特征
典型的金黃色葡萄球菌為灰黑色菌落,其外圍有一不透明圈.