1、醋酸纖維素薄膜的預(yù)處理
　　市售醋酸纖維素薄膜均為干膜片,薄膜的浸潤與選膜是電泳成敗的重要關(guān)鍵之一.將干膜片漂浮于電極緩沖液表面,其目的是選擇膜片厚薄及均勻度,如漂浮15s—30s時(shí),膜片吸水不均勻,則有白斑點(diǎn)或條紋,這提示膜片厚薄不勻,應(yīng)舍去不用,以免造成電泳后區(qū)帶扭曲,界線不清,背景脫色困難,結(jié)果難以重復(fù).由于醋酸纖維薄膜親水性比紙小,浸泡30min以上是保證膜片上有一定量的緩沖液,并使其恢復(fù)到原來多孔的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu).最好是讓漂浮于緩沖液的薄膜吸滿緩沖液后自然下沉,這樣可將膜片上聚集的小氣泡趕著走.點(diǎn)樣時(shí),應(yīng)將膜片表面多余的緩沖液用濾紙吸去,以免緩沖液太多引起樣品擴(kuò)散.但也不能吸得太干,太干則樣品不易進(jìn)入薄膜的網(wǎng)孔內(nèi),而造成電泳起始點(diǎn)參差不齊,影響分離效果.吸水量以不干不濕為宜.為防止指紋感染,取膜時(shí),應(yīng)戴指套或用鑷子.
2、緩沖液的選擇
醋酸纖維素薄膜電泳常選用pH8.6巴比妥溶液,其濃度為0.05mol/L—0.09mol/L.選擇何種濃度與樣品及薄膜的薄厚有關(guān).選擇時(shí),先初步定下某一濃度,如電泳槽兩極之間的膜長度為8 cm—10cm,則需電壓25V/cm膜長,電流強(qiáng)度為0.4mA/cm—0.5mA/cm膜寬.當(dāng)電泳達(dá)不到或超過這個(gè)值時(shí),則應(yīng)增加緩沖液濃度或進(jìn)行稀釋.緩沖液濃度過低,則區(qū)帶泳動速度快,并由于擴(kuò)散變寬；緩沖液濃度過高,則區(qū)帶泳動速度慢,區(qū)帶分布過于集中不易分辨.
3、加樣量
　　加樣品的多少與電泳條件、樣品的性質(zhì)、染色方法與檢測手段靈敏度密切相關(guān).作為一般原則,檢測方法越靈敏,加樣量則越少,對分離更有利.如加樣量過大,則電泳后區(qū)帶分離不清楚,甚至互相干擾,染色也較費(fèi)時(shí).如電泳后用洗脫法定量時(shí),每厘米加樣線上需加樣品0.1μl—0.5μl約相當(dāng)于5μg—1000μg蛋白.血清蛋白常規(guī)電泳分離時(shí),每厘米加樣線加樣量不超過1μl,相當(dāng)于60μg—80μg的蛋白質(zhì).但糖蛋白和脂蛋白電泳時(shí),加樣量則應(yīng)多些.對每種樣品加樣量均應(yīng)先作預(yù)實(shí)驗(yàn)加以選擇.
　　點(diǎn)樣好壞是獲得理想圖譜的重要環(huán)節(jié)之一,以印章法加樣時(shí),動作應(yīng)輕、穩(wěn),用力不能太重,以免將薄膜弄壞或印出凹陷而影響電泳區(qū)帶分離效果.
4、電量的選擇
　　電泳過程應(yīng)選擇合適的電流強(qiáng)度,一般電流強(qiáng)度為0.4mA/cm—0.5mA/cm寬膜為宜.電流強(qiáng)度高,尤其在溫度較高的環(huán)境中,可引起蛋白質(zhì)變性或由于熱效應(yīng)引起緩沖液中水分蒸發(fā),使緩沖液濃度增加,造成膜片干涸.電流過低,則樣品泳動速度慢且易擴(kuò)散.
5、染色液的選擇
　　對醋酸纖維素薄膜電泳后染色應(yīng)根據(jù)樣品的特點(diǎn)加以選擇.其原則是染料對被分離樣品有較強(qiáng)的著色力,背景易脫色；應(yīng)盡量采用水溶性染料,不宜選擇醇溶性染料,以免引起醋酸纖維素膜溶解.
　　應(yīng)控制染色時(shí)間.時(shí)間長,薄膜底色深不易脫去；時(shí)間短,著色淺不宜區(qū)分,或造成條帶染色不均,必要時(shí)可進(jìn)行復(fù)染.
6、透明及保存
　　透明液應(yīng)臨用前配制,以免冰乙酸及乙醇揮發(fā)影響透明效果.這些試劑最好選用分析純.透明前,薄膜應(yīng)完全干燥.透明時(shí)間應(yīng)掌握好,如在透明乙液中浸泡時(shí)間太長則薄膜溶解,太短則透明度不佳.
　　透明后的薄膜完全干燥后才浸入石蠟中,使薄膜軟化.如有水,則液體石蠟不易浸入,薄膜不易平展.