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  • 如何通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證所研究的一個(gè)蛋白質(zhì)A在大腸桿菌中是否獲得了表達(dá)?

    如何通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證所研究的一個(gè)蛋白質(zhì)A在大腸桿菌中是否獲得了表達(dá)?
    前輩,再問一道.
    生物人氣:607 ℃時(shí)間:2020-04-16 06:11:25
    優(yōu)質(zhì)解答
    最基本和常用的簡(jiǎn)單廉價(jià)方法
    1.首先 你要知道這個(gè)A蛋白的分子量.
    2. 按照正常的基因工程方法做好重組表達(dá)質(zhì)粒,對(duì)其進(jìn)行(誘導(dǎo))過表達(dá),用宿主菌株作為對(duì)照.
    3.對(duì)2種不同的菌株進(jìn)行分別發(fā)酵培養(yǎng)后,按照常規(guī),離心取菌、破碎細(xì)胞、提取全蛋白、進(jìn)行PAGE 電泳(加上適宜分子量范圍的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn),marker),對(duì)比2種細(xì)菌的PAGE結(jié)果,檢查在A分子量位置處 過表達(dá)菌株是否有粗帶形成,若有說明表達(dá)了,否則跟對(duì)照菌株一樣的話,則說明未表達(dá).
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