考馬斯亮藍(lán)法（Bradford法）測定蛋白質(zhì)濃度
1、試劑：
（1）考馬斯亮藍(lán)試劑：
考馬斯亮藍(lán)G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇,加入100ml 85% H3PO4,用蒸餾水稀釋至1000ml,濾紙過濾.最終試劑中含0.01%（W/V）考馬斯亮藍(lán)G—250,4.7%（W/V）乙醇,8.5%（W/V）H3PO4.
（2）標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液：
純的牛血清血蛋白,根據(jù)其純度同0.15mol/L NaCl配制成100 ug/ml蛋白溶液.
2.器材：\x0b（1）可見光分光光度計(jì) （2）旋渦混合器
3、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
試管編號(hào)\x050\x051\x052\x053\x054\x055\x056
100ug/ml標(biāo)準(zhǔn)蛋白（ml）\x050.0\x050.1\x050.2\x050.3\x050.4\x050.5\x050.6
0.15mol/L NaCl （ml）\x051\x050.9\x050.8\x050.7\x050.6\x050.5\x050.4
考馬斯亮藍(lán)試劑 （ml）\x055\x055\x055\x055\x055\x055\x055
搖勻,1h內(nèi)以0號(hào)管為空白對(duì)照,在595nm處比色\x05\x05\x05\x05\x05\x05\x05
A595nm\x05\x05\x05\x05\x05\x05\x05
以A595nm為縱坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)蛋白含量為橫坐標(biāo)（六個(gè)點(diǎn)為10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug）,在坐標(biāo)軸上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.
4、樣品中蛋白質(zhì)含量的測定
另取兩支干凈的試管（做一重復(fù)）,加入合適濃度的待測樣品,使其測定值在標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi),測定方法同上,由樣品液的吸光度查標(biāo)準(zhǔn)曲線即可求出含量.
注意事項(xiàng)：
1、 如果要求嚴(yán)格,最好在試劑加入后的5~20min內(nèi)測定光 吸收,因?yàn)檫@段時(shí)間內(nèi)顏色是最穩(wěn)定的.
2、 若選擇在旋渦混合器上混合,注意不要太劇烈,以免產(chǎn)生大量氣泡而難于消除.