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  • 我現(xiàn)在想要將引物加水稀釋,OD:2.0,nmol/OD=5.17,MW=5784.83,請問我該如何加水稀釋?

    我現(xiàn)在想要將引物加水稀釋,OD:2.0,nmol/OD=5.17,MW=5784.83,請問我該如何加水稀釋?
    我現(xiàn)在想要將引物加水稀釋,OD:2.0,nmol/OD=5.17,MW=5784.83,請問我該如何加水稀釋,為什么?(一定要說明原因?。?/div>
    生物人氣:650 ℃時間:2020-06-25 17:07:06
    優(yōu)質(zhì)解答
    以下使用方法希望對你有用:

    1.       OligoDNA是以O(shè)D260為單位來計量的,是指在1ml體積1cm光程標(biāo)準(zhǔn)比色皿中,260nm波長下吸光度為1A260nm 的Oligo溶液定義為1OD260單位.根據(jù)此定義,1OD260單位相當(dāng)于33µg的OligoDNA,您可根據(jù)此數(shù)據(jù)和您的OligoDNA分子量計算得到摩爾數(shù),以此計算不同摩爾濃度的溶液.2.       引物合成公司提供的序列報告中分子量計算公式如下:MW=(A堿基數(shù)×312)+(C堿基數(shù)×288)+(G堿基數(shù)×328)+(T堿基數(shù)×303)-61.例如 :TGGGCGGCGGTGGTGTTACGT MW=(1×312)+(3×288)+(11×328)+(6×303)-61=65413.       OligoDNA的分子量還可以用以下近似方法計算:OligoDNA中的每個脫氧核苷酸堿基的平均分子量近似為324.5,則一條OligoDNA的分子量=堿基數(shù)×324.5.例如,您得到一管標(biāo)為1OD260nm的20 個堿基OligoDNA分子量=20×324.5=6490質(zhì)量數(shù)=1×33=33µg摩爾數(shù)=33/6490=0.0051µmol4.       引物在出廠時都標(biāo)有1OD 相當(dāng)于多少µmol 的計算結(jié)果,進(jìn)行稀釋時的引物加水量可以按以下公式計算:      稀釋成100pmol/µl時:1OD引物的加水量(µl)=1OD相當(dāng)于µmol 數(shù)×10000例如:您拿到的引物DNA合成報告單上標(biāo)有1OD≈0.0035µmol,包裝量是1OD/管,如果您希望將引物濃度定為100pmol/µl(µmol/L),那么只需用35µl無核酸酶的雙蒸水將1OD的引物干粉溶解即可.5.       由于OligoDNA呈很輕的干膜狀附在管壁上,打開時極易散失,所以打開管子前請先離心,然后再慢慢打開管蓋,溶解時請加足量水后蓋上管蓋,充分上下振蕩5-10分鐘.6.       需對OligoDNA作電泳分析,必須采用含7M尿素的聚丙烯酰胺凝膠電泳和1倍TBE Buffer,瓊脂糖電泳不適于OligoDNA電泳,另外為防止加樣時的擴(kuò)散和二級結(jié)構(gòu)影響,樣品上樣前必須加飽和尿素處理再上樣.7.       OligoDNA的5’端和3’端均為羥基,若需磷酸基團(tuán)的則要另外再處理或直接在合成時于5’和3’端標(biāo)上磷酸.8.       由于溴化乙錠對單鏈寡聚DNA的染色效果與DNA的結(jié)構(gòu)和長度關(guān)系密切,相等OD值的不同OligoDNA樣品染色后深淺可大不相同,若電泳后EB染色不出現(xiàn)條帶或出現(xiàn)的條帶很淺,您可將電泳凝膠于熒光板上再在紫外燈下觀察,往往會看到明亮的綠色熒光背景下清晰的黑色條帶;若無此條件,也可用紫外分光光計度對OD值進(jìn)行檢測.9.       干粉狀態(tài)的OligoDNA可長期貯存.溶解后建議分裝成若干管,-20℃保存,用一管取一管.溶解后的引物4℃保存不超一周為宜.
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