1.前處理
把蛋白質(zhì)從原來的組織或溶解狀態(tài)釋放出來,保持原來的天然狀態(tài),并不丟
失生物活性.常用的方法：勻漿器破碎、超生波破碎、纖維素酶處理以及溶菌酶等.
超聲波破碎法：當聲波達到一定頻率時,使液體產(chǎn)生空穴效應(yīng)使細胞破碎的技術(shù).超聲波引起的快速振動使液體局部產(chǎn)生低氣壓,這個低氣壓使液體轉(zhuǎn)化為氣體
,即形成很多小氣泡.由于局部壓力的轉(zhuǎn)換,壓力重新升高,氣泡崩潰.崩潰的氣泡產(chǎn)生一個振動波并傳送到液體中,形成剪切力使細胞破碎.
2．粗分級
分離可用鹽析、等電點沉淀和有機溶劑分級分離等方法.這些方法的特點是簡便、處理量大,
3．細分級
樣品的進一步純化.樣品經(jīng)粗分離以后,一般體積較小,雜蛋白大部分已被除去.進一步純化,一般使用層析法包括凝膠過濾、離子交換層析、吸附層析以及親和層析等.必要時還可選擇電泳、等電聚焦等作為最后的純化步驟.
結(jié)晶是最后的一步