博凌科為-為你相對(duì)定量還是絕對(duì)定量,這要看你的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?如果你只關(guān)心某一基因的相對(duì)表達(dá)量,舉例來(lái)說(shuō),如桃果實(shí),當(dāng)你采收后,很易變軟,那我現(xiàn)用一種藥劑處理一下,使它變軟的速度慢一些或不變軟,這就出現(xiàn)了對(duì)照和處理,如果你只想知道桃果實(shí)軟化相關(guān)的某一基因在處理后的表達(dá)較對(duì)照降低或增加了幾倍,那只需做相對(duì)定量就可以了.至于絕對(duì)定量而言,也舉個(gè)例子吧,醫(yī)生對(duì)一個(gè)病人的每毫升血液中有到底有多少病毒顆粒感興趣,這是就要做絕對(duì)定量了.絕對(duì)定量中必須要用到標(biāo)準(zhǔn)曲線,且其標(biāo)準(zhǔn)品濃度已知,并要求相當(dāng)精確.相對(duì)定量也可以用標(biāo)準(zhǔn)曲線,其目的是計(jì)算擴(kuò)增效率,也可以不用,通過(guò)擴(kuò)增曲線求擴(kuò)增效率.你要是想做梯度稀釋的cDNA樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線,這個(gè)容易,但我建議你買(mǎi)個(gè)EasyDilution,Takara有賣(mài),這個(gè)有助于你在稀釋樣品時(shí)不會(huì)因粘在槍頭上而帶來(lái)過(guò)多的誤差.操作如下：1、準(zhǔn)備直接反轉(zhuǎn)錄的cDNA樣品8ul；2、轉(zhuǎn)移到另一新離心管中再加8ulEasyDilution,混均；3、從2中再取8ul放到另一管中,再加8ulEasyDilution,混均；4、重復(fù)步驟3,共有5個(gè)點(diǎn)就可以了.上述是按2倍的梯度來(lái)稀釋的,這要看你研究的基因表達(dá)豐度,若很高你也可按10倍的梯度來(lái)做.不知我的解釋是否能讓你明白.