高氏1號培養(yǎng)基是分離和培養(yǎng)放線菌的合成培養(yǎng)基.這種培養(yǎng)基是由可溶性淀粉（作為碳源）,KNO3（作為氮源）,NaCl、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O（作為無機(jī)鹽,為微生物提供鈉、鉀、磷、鎂、硫等離子）和FeSO4· 7H2O（作為微生物的微量元素,提供鐵離子）等組成.由于磷酸鹽和鎂鹽相混合時產(chǎn)生沉淀,因此,在混合培養(yǎng)基成分時,一般是按配方的順序依次溶解各成分.對于象FeSO4·7H2O這樣的微量成分,則可預(yù)先配成高濃度的貯備液,在配制培養(yǎng)基時按需要加入一定的量.
高氏1號培養(yǎng)基配方如下：
可溶性淀粉 20g
NaCl 0．5g
KNO3 1g
K2HPO4·3H2O 0．5g
MgSO4· 7H2O 0．5g
FeSO4·7H2O 0．01g
瓊脂 15—20g
水 1000ml
pH 7．4—7．6
三、器材
可溶性淀粉,KNO3,NaCl,K2HPO4·3H2O,MgSO4·7H2O, FeSO4·7H2O,瓊脂, 1mol/L NaOH, 1mol/ LHCl；
試管,三角燒瓶,燒杯,量筒,玻棒,培養(yǎng)基分裝器,扭力天平,牛角匙,高壓蒸汽滅菌鍋,pH試紙（pH5．5—9．0）,棉花,牛皮紙,記號筆,麻繩,紗布等.
四、操作步驟
1．稱量和溶化
按配方先稱取可溶性淀粉,放入小燒杯中,并用少量冷水將淀粉調(diào)成糊狀,再加入少于所需水量的沸水中,繼續(xù)加熱,使可溶性淀粉完全溶化.再稱取其他各成分依次逐一溶化.對微量成分FeSO4·7H2O可先配成高濃度的貯備液后再加入,方法是先在100ml水中加入1g的FeSO4·7H2O配成0．01g/ml,再在1000ml培養(yǎng)基中加入1ml的0．01g/ml的貯備液即可.待所有藥品完全溶解后,補(bǔ)充水分到所需的總體積.
牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基,有時又稱為普通培養(yǎng)基.它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl.其中牛肉膏為微生物提供碳源和能源,磷酸鹽、蛋白胨主要提供氮源,而NaCl提供無機(jī)鹽.在配制固體培養(yǎng)基時還要加入一定量瓊脂作凝固劑.瓊脂在常用濃度下96℃時溶化,一般實(shí)際應(yīng)用時在沸水浴中或下面墊以石棉網(wǎng)煮沸溶化,以免瓊脂燒焦.瓊脂在40℃時凝固,通常不被微生物分解利用.固體培養(yǎng)基中瓊脂的含量根據(jù)瓊脂的質(zhì)量和氣溫的不同而有所不同.
由于這種培養(yǎng)基多用于培養(yǎng)細(xì)菌,因此,要用稀酸或稀堿將其pH調(diào)至中性或微堿性,以利于細(xì)菌的生長繁殖.
牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方如下：
牛肉膏 3g
蛋白胨 10g
NaCl 5g
瓊脂 15—20g
水 1000ml
pH 7．4—7．6
三、器材
牛肉膏,蛋白胨, NaCl,瓊脂；
1mol/L NaOH, 1mol/L HCl；
試管,三角燒瓶,燒杯,量筒,玻棒,培養(yǎng)基分裝器,扭力天平,牛角匙,高壓蒸汽滅菌鍋,pH試紙（ pH 5．5—9．0）,棉花,牛皮紙,記號筆,麻繩,紗布等.
四、操作步驟
1．稱量
按培養(yǎng)基配方比例依次準(zhǔn)確地稱取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入燒杯中.牛肉膏常用玻棒挑取,放在小燒杯或表面皿中稱量,用熱水溶化后倒入燒杯.也可放在稱量紙上,稱量后直接放入水中,這時如稍微加熱,牛肉膏便會與稱量紙分離,然后立即取出紙片.蛋白胨很易吸潮,在稱取時動作要迅速.另外,稱藥品時嚴(yán)防藥品混雜,一把牛角匙用于一種藥品,或稱取一種藥品后,洗凈、擦干,再稱取另一藥品,瓶蓋也不要蓋錯.
2．溶化
在上述燒杯中可先加入少于所需要的水量,用玻棒攪勻,然后,在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解.待藥品完全溶解后,補(bǔ)充水分到所需的總體積.如果配制固體培養(yǎng)基,將稱好的瓊脂放入已溶化的藥品中,再加熱溶化,在瓊脂溶化的過程中,需不斷攪拌,以防瓊脂糊底使燒杯破裂.最后補(bǔ)足所失的水分.
3．調(diào)pH
在未調(diào)pH前,先用精密pH試紙測量培養(yǎng)基的原始pH值,如果pH偏酸,用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加入1mol/L NaOH,邊加邊攪拌,并隨時用pH試紙測其pH值,直至pH達(dá)7．6.反之,則用1mol/L HCl進(jìn)行調(diào)節(jié).注意pH值不要調(diào)過頭,以避免回調(diào),否則,將會影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度.
對于有些要求pH值較精確的微生物,其pH的調(diào)節(jié)可用酸度計進(jìn)行（使用方法,可參考有關(guān)說明書）.
4．過濾
趁熱用濾紙或多層紗布過濾,以利結(jié)果的觀察.一般無特殊要求的情況下,這一步可以省去（本實(shí)驗(yàn)無需過濾）.
5．分裝
按實(shí)驗(yàn)要求,可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)或三角燒瓶內(nèi).分裝裝置見圖Ⅴ-1.
分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染.
(1)液體分裝分裝高度以試管高度的1/4左右為宜.
(2)固體分裝分裝試管,其裝量不超過管高的1/5,滅菌后制成斜面,如圖Ⅴ-2.分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜.
(3)半固體分裝試管一般以試管高度的1/3為宜,滅菌后垂直待凝.
6．加塞
培養(yǎng)基分裝完畢后,在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞,以阻止外界微生物進(jìn)入培養(yǎng)基內(nèi)而造成污染,并保證有良好的通氣性能（棉塞制作方法附本實(shí)驗(yàn)后面）.
7．包扎
加塞后,將全部試管用麻繩捆扎好,再在棉塞外包一層牛皮紙,以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞,其外再用一道麻繩扎好.用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期.三角燒瓶加塞后,外包牛皮紙,用麻繩以活結(jié)形式扎好,使用時容易解開,同樣用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期.
8．滅菌
將上述培養(yǎng)基以1．05kg/cm2（15磅/英寸2）,121．3℃, 20分鐘高壓蒸汽滅菌.如因特殊情況不能及時滅菌,則應(yīng)放入冰箱內(nèi)暫存.
9．?dāng)R置斜面
將滅菌的試管培養(yǎng)基冷至50℃左右,將試管棉塞端擱在玻棒上,擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜.
10．無菌檢查
將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃的溫室中培養(yǎng)24—48小時,以檢查滅菌是否徹底.
附：棉塞的制作
棉塞的作用有二：一是防止雜菌污染；二是保證通氣良好.因此,棉塞質(zhì)量的優(yōu)劣對實(shí)驗(yàn)的結(jié)果有很大的影響.正確的棉塞要求形狀、大小、松緊與試管口（或三角燒瓶口）完全適合,過緊則防礙空氣流通,操作不便；過松則達(dá)不到濾菌的目的.加塞時,應(yīng)使棉塞長度的1/3在試管口外,2/3在試管口內(nèi),如圖Ⅴ-3.棉塞的制作過程如圖Ⅴ-4.
此外,在微生物實(shí)驗(yàn)和科研中,常要用通氣塞.所謂通氣塞,就是幾層紗布（一般為8層）相互重疊而成,或是在兩層紗布間均勻鋪一層棉花而成.這種通氣塞通常加在裝有液體培養(yǎng)基的三角燒瓶口上.經(jīng)接種后,放在搖床上進(jìn)行振蕩培養(yǎng),以獲得良好通氣促使菌體的生長或發(fā)酵
http://bio.biox.cn/Biology/200701/20070106230740_25501.shtml
http://bio.biox.cn/Biology/200701/20070106230741_25502.shtml