博凌科為-為你免疫-PCR主要由兩個(gè)部分組成.第一部分是類似于普通酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）的抗原抗體反應(yīng).第二部分即常規(guī)的PCR擴(kuò)增和電泳檢測(cè).免 疫-PCR與ELISA的區(qū)別就在于ELISA是以堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶來標(biāo)記抗體,用顏色反應(yīng)來表明陽性或陰性結(jié)果,而免疫-PCR則是以一段特定的雙鏈或單鏈DNA來標(biāo)記抗體,用PCR擴(kuò)增抗體所連接的DNA,并進(jìn)行電泳檢測(cè),因此可由PCR產(chǎn)物的量來反映抗原分子的量.由于PCR 的高擴(kuò)增能力,只要存在著極微量的抗原抗體反應(yīng),PCR都能大量擴(kuò)增抗體所連接的DNA分子,再用電泳來表明實(shí)驗(yàn)結(jié)果.免疫-PCR的關(guān)鍵之處就在于用一 個(gè)連接分子將一段特定的DNA連接到抗體上,在抗原和DNA之間建立相對(duì)應(yīng)關(guān)系,從而將對(duì)蛋白質(zhì)的檢測(cè)轉(zhuǎn)變?yōu)閷?duì)核酸的檢測(cè).最初Sano等人建立的免疫-PCR實(shí)驗(yàn)流程如下：（1）再包被緩沖液稀釋抗原BSSA,并固定在微滴定板上.（2）微滴定板上加入相應(yīng)的已稀釋的單克隆抗體,并洗去未結(jié)合的抗體分 子.（3）加入稀釋的已與生物素化PUC19的結(jié)合的鏈親和素-蛋白A嵌合體（蛋白A能與抗體結(jié)合,而鏈親和素可與生物素化PUC19中的生物素結(jié)合）, 并洗去未結(jié)合的嵌合蛋白-Puc19復(fù)合物.（4）PCR擴(kuò)增抗體所連接的Puc19.（5）瓊脂糖凝膠電泳,EB 顯色檢測(cè)Puc19.運(yùn)用這種方法,Sano等人可檢測(cè)到600個(gè)BSA抗原分子.與用堿性磷酸酶作為標(biāo)記物的ELISA方法相比,免疫-PCR的敏感度比ELISA高106.在這免疫-PCR系統(tǒng)中,鏈親和素-蛋白A嵌合體作為一個(gè)連接分子起著橋梁作用.它的兩個(gè)獨(dú)立結(jié)合位點(diǎn)蛋白A和鏈親和素分別與IgG 的Fc段和生物素化DNA中的生物素結(jié)合,從而在蛋白質(zhì)和核酸之間建立對(duì)應(yīng)關(guān)系,通過PCR擴(kuò)增,將抗原抗體反應(yīng)的特異性高度放大.因此,免疫-PCR結(jié) 合了抗原抗體反應(yīng)的特異性和PCR的高度敏感性,成為一種極為敏感的抗體依賴的抗原檢測(cè)技術(shù).