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  • 大腸桿菌感受態(tài)轉(zhuǎn)化的原理是什么?

    大腸桿菌感受態(tài)轉(zhuǎn)化的原理是什么?
    生物人氣:849 ℃時間:2020-05-14 06:31:31
    優(yōu)質(zhì)解答
    所謂的轉(zhuǎn)化是將外源DNA分子引入受體細(xì)胞,使之獲得新的遺傳性狀的一種手段,它是微生物遺傳、分子遺傳、基因工程等研究領(lǐng)域的基本實驗技術(shù).
    在自然條件下,很多質(zhì)粒都可通過細(xì)菌接合作用轉(zhuǎn)移到新的宿主內(nèi),但在人工構(gòu)建的質(zhì)粒載體中,一般缺乏此種轉(zhuǎn)移所必需的mob基因,因此不能自行完成從一個細(xì)胞到另一個細(xì)胞的接合轉(zhuǎn)移.如需將質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)移進(jìn)受體細(xì)菌,需誘導(dǎo)受體細(xì)菌產(chǎn)生一種短暫的感受態(tài)以攝取外源DNA.細(xì)胞處于能夠吸收DNA的狀態(tài)稱感受態(tài),處于感受態(tài)的細(xì)胞稱作感受態(tài)細(xì)胞.
    轉(zhuǎn)化過程所用的受體細(xì)胞一般是限制修飾系統(tǒng)缺陷的變異株,即不含限制性內(nèi)切酶和甲基化酶的突變體(Rˉ,Mˉ),它可以容忍外源DNA分子進(jìn)入體內(nèi)并穩(wěn)定地遺傳給后代.受體細(xì)胞經(jīng)過一些特殊方法的處理后,細(xì)胞膜的通透性發(fā)生了暫時性的改變,成為能允許外源DNA分子進(jìn)入的感受態(tài)細(xì)胞.進(jìn)入受體細(xì)胞的DNA分子通過復(fù)制,表達(dá)實現(xiàn)遺傳信息的轉(zhuǎn)移,使受體細(xì)胞出現(xiàn)新的遺傳性狀.將經(jīng)過轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞在篩選培養(yǎng)基中培養(yǎng),即可篩選出轉(zhuǎn)化子(即帶有異源DNA分子的受體細(xì)胞).
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