幾種細(xì)胞固定方法
幾種細(xì)胞固定方法
生物人氣:747 ℃時(shí)間:2020-05-21 09:41:51
優(yōu)質(zhì)解答
選擇最佳固定液標(biāo)準(zhǔn)是:\x0d(1)最好地保持細(xì)胞和組織的形態(tài)結(jié)構(gòu);\x0d(2)最大限度地保存抗原的免疫活性.一些含重金屬的固定液在免疫組化和細(xì)胞化學(xué)技術(shù)中是禁用的;\x0d(3)不要用可能帶有自發(fā)熒光的固定劑,如帶有苦味酸的固定劑,還有甲醛升汞固定液,會(huì)使上皮細(xì)胞產(chǎn)生非特異性熒光;\x0d(4)固定劑的選擇、固定時(shí)間、溫度和PH值都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果.\x0d單純固定液(1)4%中性甲醛固定液:最常用的固定液,能滿足常規(guī)HE及免疫組化、PCR等工作(Job).中性甲醛是以PH7.2-7.4的磷酸緩沖液為溶劑配制的,其固定效果及對(duì)組織抗原性的保存均優(yōu)于一般的4%甲醛固定液.此固定液配制后應(yīng)密封并保存在陰涼處,保存時(shí)間不超過(guò)一個(gè)月.\x0d甲醛(40%) 100ml\x0d無(wú)水磷酸氫二鈉 6.5g\x0d磷酸二氫鈉 4.0g\x0d蒸餾水 900ml\x0d(2)乙醇固定液:使用時(shí)以80%-95%的濃度為宜,具有硬化、固定、脫水等作用,對(duì)組織滲透力較弱,因此很少單獨(dú)使用,但其保存組織中的核酸強(qiáng)于中性甲醛,故常用于有核酸操作的實(shí)驗(yàn)或檢查,假如用于證實(shí)尿酸結(jié)晶和保存糖原,可用于100%乙醇固定組織.\x0d(3)4%多聚甲醛固定液:主要用于培養(yǎng)細(xì)胞的固定.\x0d混合固定液(1)乙醇-甲醛(乙醇-福爾馬林,AF)固定液:適用于皮下組織中肥大細(xì)胞的固定.該固定液有固定兼脫水作用,固定后的標(biāo)本可直接入95%乙醇脫水.\x0d甲醛(40%) 100ml\x0d95%乙醇 900ml\x0d(2)B5(醋酸鈉-升汞-甲醛)固定液:多用于固定淋巴組織.染色前應(yīng)進(jìn)行脫汞沉淀處理.\x0d無(wú)水醋酸鈉 1.25g升汞 6.0g蒸餾水 90ml\x0d使用前加入甲醛 10ml\x0d(3)Bouin固定液:非凡適用于睪丸活檢組織的固定.Bouin液對(duì)組織固定較均勻,收縮很少,不會(huì)使組織變硬變脆.需現(xiàn)配現(xiàn)用.\x0d飽和苦味酸水溶液(約1.22%) 75ml甲醛 25ml冰醋酸 5ml(4)Carnoy固定液:穿透能力強(qiáng),可很好的固定細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核,非凡適用于固定外膜致密的組織,也適用于糖原及尼氏小體的固定.\x0d無(wú)水乙醇 60ml氯仿 30ml冰醋酸 10ml\x0d(5) Zenker固定液:經(jīng)此液固定的標(biāo)本,細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)染色頗為清楚,但成本較高且需非凡處理汞.該固定液要避免接觸陽(yáng)光,以免引起化學(xué)變化而失效.\x0d升汞 5.0g\x0d重鉻酸鉀 2.5g\x0d蒸餾水(加至) 100ml
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