1.鍍銀法染色
（1）清洗玻片 選擇光滑無裂痕的玻片,最好選用新的.為了避免玻片相互重疊,應(yīng)將玻片插在專用金屬架上,然后將玻片置洗衣粉過濾液中（洗衣粉煮沸后用濾紙過濾,以除去粗顆粒）,煮沸20min.取出稍冷后用自來水沖洗、晾干,再放入濃洗液中浸泡5—6天,使用前取出玻片,用自來水沖去殘酸,再用蒸餾水洗.將水瀝干后,放入95%乙醇中脫水.
（2）菌液的制備及制片：菌齡較老的細菌容易失落鞭毛,所以在染色前應(yīng)將待染細菌在新配制的半固體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基斜面上（培養(yǎng)基表面濕潤,斜面基部含有冷凝水）.用消過毒的蓋玻片切取培養(yǎng)基邊緣的小塊瓊脂放進試管中,注意要輕放并輕輕搖動,將該試管放在37℃恒溫箱中靜置10min（放置時間不宜太長,否則鞭毛會脫落）,讓幼齡菌的鞭毛松展開.然后,吸取少量菌液滴在潔凈玻片的一端,立即將玻片傾斜,使菌液緩慢地流向另一端,用吸水紙吸去多余的菌液.涂片放空氣中自然干燥.要注意的是菌液的含菌數(shù)量一定要少!
干燥后的處理
(1) 干燥后用稀鹽酸或稀氫氧化鈉滴,并立即傾斜玻片,使酸(堿)液流下,并自然干燥.
(2) 用沖稀的頭發(fā)頂型劑滴加,處理一到三分鐘(具體的要實驗才能知道),并自然干燥.
用于鞭毛染色的菌體是用半固體培養(yǎng)基才用支點法培養(yǎng)的.方法是將0.3-0.4%的瓊脂肉膏培養(yǎng)基熔化后倒入無菌平皿中,在培養(yǎng)皿中間放三塊成分減半（但是NaCl不減半,瓊脂為正常百分比）的,恒溫培養(yǎng)12-24h后,取擴散菌落的邊緣制作涂片.
（3）染色
①滴加A液,染4—6min.
②用蒸餾水充分洗凈A液.
③用B液沖去殘水,再加B液于玻片上,在酒精燈火焰上加熱至冒氣,約維持0.5—1min（加熱時應(yīng)隨時補充蒸發(fā)掉的染料,不可使玻片出現(xiàn)干涸區(qū)）.
④用蒸餾水洗,自然干燥.
（4）鏡檢：先低倍,再高倍,最后用油鏡檢查.
結(jié)果：菌體呈深褐色,鞭毛呈淺褐色.
下面就如何做好鞭毛染色談幾點意見供參考.
1．要選好菌種.一般用周生鞭毛菌（如普通變形桿菌Proteus vulgaris）較好,這類菌的鞭毛多而長易于觀察.
2．要注意培養(yǎng)條件和培養(yǎng)時間：①用點接法在新配制的牛肉膏蛋白胨半固體平板上接種.一般一個平板點接3～4處.經(jīng)比較用半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)出來的菌體活動度大,鞭毛長且多,易于染色,這可能與半固體培養(yǎng)基更適于菌體運動、鞭毛生長較好有關(guān).用點接種法在平板上接種更易于挑取邊緣幼齡的菌體.②培養(yǎng)時間要嚴格掌握,一般培養(yǎng)9～12h較好,菌齡超過15h,鞭毛染色效果較差,這可能與老齡菌體活動度降低、鞭毛易脫落有關(guān).冰箱長期保存的菌種不宜直接用于鞭毛染色,需用新制備的斜面連續(xù)轉(zhuǎn)接2～3次后再染色.
3．所用玻片的準備：①用過的舊載片要選擇光滑無劃痕的,放入已加入洗衣粉的蒸餾水中煮沸（如能預(yù)先過濾去渣更好）,煮畢冷卻后,清水洗凈,放入濃洗液中浸泡24h,取出用清水沖洗殘酸,最后用蒸餾水洗凈,瀝干水并放于95％乙醇中脫水,取出后燒去酒精,即可使用.②新的載片雖沒有油污、劃痕,但含游離堿較多,所以要用2％鹽酸浸泡幾小時,用自來水沖洗干凈,然后再用蒸餾水洗凈,瀝干后再用效果較好.
4．染色液一定要新鮮,特別是硝酸銀染色法中更是如此,A染液和B染液最好都現(xiàn)用現(xiàn)配,A液一般不能放置.
5．染色過程中的細節(jié)也應(yīng)充分注意：①取菌要取菌落邊緣的幼齡菌體.②取菌后的接種環(huán)在載片上的蒸餾水中輕輕沾幾下即可,不要用力太猛,更不能用接種環(huán)大幅度涂開；將載片稍傾斜,使菌液散開即可,否則鞭毛易脫落,造成染色失敗.③鞭毛染色的玻片只能自然干燥,不能用熱風(fēng)吹干,不能熱固定,這是由于加熱后菌體易變形,鞭毛易脫落,影響觀察.④A染液染3～5min,其后用蒸餾水（自來水效果差）沖洗時一定要充分,否則加B染液后,背景很臟,鞭毛不易被觀察到,影響實驗效果.⑤加B染液后,將玻片稍加熱（但不能太熱,更不能沸騰或蒸干）使其微冒蒸汽,30～60s,染色效果較不加熱為好.⑥B染液染完后,用蒸餾水沖洗比用自來水沖洗效果好.
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