首先根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要選擇相應(yīng)的載體
其次分析你的基因序列以及載體序列上的酶切位點(diǎn),切記在載體上所選擇的酶切位點(diǎn)要和你的基因序列上相一致,并且這兩個(gè)酶切位點(diǎn)在你的基因序列中并不存在,否則會(huì)將基因切斷
再次就是對(duì)基因和載體進(jìn)行酶切了,基因要是直接用帶有酶切位點(diǎn)的引物進(jìn)行PCR的話就不用再酶切了.酶切之后進(jìn)行連接,一般都有連接試劑盒的.
最后的重組質(zhì)粒要轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中進(jìn)行擴(kuò)增,然后提取這個(gè)質(zhì)粒進(jìn)行酶切鑒定.