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  • 有別人構(gòu)建好的含有目的基因的表達(dá)載體質(zhì)粒,但是只知道目的基因的mRNA序列,如何做PCR檢測目的基因?

    有別人構(gòu)建好的含有目的基因的表達(dá)載體質(zhì)粒,但是只知道目的基因的mRNA序列,如何做PCR檢測目的基因?
    生物人氣:529 ℃時間:2020-04-12 11:57:45
    優(yōu)質(zhì)解答
    第一個辦法 ,如果你有這個載體的通用引物,可以用這倆通用引物做PCR,然后電泳觀察條帶的大小,如果條帶和你的mRNA的大小相近(應(yīng)該是略大于mRNA的,因?yàn)閹в辛诵〔糠值妮d體序列),那就說明這里邊是插入目的基因的.
    第二個辦法,如果你能知道這個基因插入位點(diǎn)的酶切位點(diǎn)是什么的話,可以做雙酶切來做鑒定,之后跑電泳看切出來的條帶大小是否符合,注意如果切得完全的話應(yīng)該是兩條帶,后邊較大的是載體,前邊的是你的mRNA.
    如果沒有通用引物但是有這個mRNA的兩端引物,有人可以用這倆引物來PCR,但是這個方法不推薦,因?yàn)榭赡苡袥]連接進(jìn)去的rna污染會出現(xiàn)假陽性,因此一般還要配合酶切鑒定.
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