1、平板傾注法\x05\x05
1）、以無菌操作,將檢樣25g（或25ml）剪碎放于含有225ml滅菌生理鹽水的廣口瓶內(nèi)（瓶內(nèi)置有適量玻璃珠）或滅菌研缽內(nèi),經(jīng)充分振搖或研磨用成1：10的均勻稀釋液.
2）、用1.0ml滅菌吸管吸取1：10稀釋液1.0ml,沿管壁徐徐注入含有9.0ml滅菌生理鹽水的試管內(nèi)（注意吸管尖端不要觸及管內(nèi)液面）,振搖試管混合均勻,作成1：100的稀釋液.
3）、另取1.0ml滅菌吸管,按上述操作作10倍稀釋,如此每遞增稀釋一次,即換1支1.0ml吸管.
4）、根據(jù)食品衛(wèi)生要求或?qū)?biāo)本污染程度的估計(jì),選擇2-3個(gè)適宜稀釋度,分別作10倍遞增稀釋的同時(shí),即以吸取該稀釋液的吸管移1.0ml稀釋液于滅菌平皿內(nèi),每個(gè)稀釋度作兩個(gè)平皿.
5）、稀釋液移入平皿后應(yīng)及時(shí)將涼至46℃營養(yǎng)瓊脂（可放于46×1℃水浴保溫）注入平皿約15ml,并移動(dòng)平皿使混合均勻.同時(shí)將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1.0ml滅菌生理鹽水的平皿內(nèi)作空白對照.
6）、待稀釋液入平皿后,翻轉(zhuǎn)平板,置36×1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h（肉、水產(chǎn)品、乳和蛋品為48±2h）取出,計(jì)算平板內(nèi)菌落數(shù),乘以稀釋倍數(shù),即得每克（或ml）樣品所含菌落總數(shù).
2、平板表面涂布法
將營養(yǎng)瓊脂制成平板,經(jīng)50℃l一2小時(shí)或35℃18—20小時(shí)干燥后,于其上滴加檢樣稀釋液0．2ml,用L捧涂布于整個(gè)平板的表面,放置片刻(約lO分鐘),將平板翻轉(zhuǎn),移至36±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24±2小時(shí)(水產(chǎn)品用30℃培養(yǎng)48±2小時(shí)),取出,按前述方式進(jìn)行菌落計(jì)數(shù),然后乘以5(由O．2m1換算為1m1),再乘以樣品稀釋的倍數(shù),即得每g或m1 檢樣所含菌落數(shù).此法較上述傾注法為優(yōu),因菌落生長在表面,便于識(shí)別和檢查其形態(tài),雖檢樣中帶有食品顆粒也不會(huì)發(fā)生混淆,同時(shí)還可使細(xì)菌不必遭受融化瓊脂的熱力,不致因此而使菌細(xì)胞受到損傷而不生長,從而可避免由于檢驗(yàn)操作中的不良因素而使檢樣中細(xì)菌菌落數(shù)降低.但是本法取樣量較傾注法為少(僅傾注法的五分之一),代表性將受到一定的影響.
3、平板表面點(diǎn)滴法 與涂布法相似.所不同者,只是用標(biāo)定好的微量吸管或注射器針頭按滴(使每滴相當(dāng)于0．025mi)將檢樣稀釋液滴加于瓊脂平板上固定的區(qū)域(預(yù)先在平板背面用標(biāo)記筆劃成四個(gè)區(qū)域),每個(gè)區(qū)域滴1滴,每個(gè)稀釋度滴兩個(gè)區(qū)域,作為平行試驗(yàn).滴加后,將平板放平片刻(約5～10分鐘),然后翻轉(zhuǎn)平板,如前移入溫箱內(nèi)培養(yǎng)6～8小時(shí)后進(jìn)行計(jì)數(shù),將所得菌落數(shù)乘以40(由o.025ml換算為1ml),再乘以樣品稀釋的倍．?dāng)?shù),即得每g或ml檢樣所含菌落數(shù).李兆普等利用此方法,與傾注法進(jìn)行對比試驗(yàn),經(jīng)過六種食品,1536件檢樣的考核結(jié)果,傾注法低于點(diǎn)滴法及涂抹法.本法具有快速、節(jié)省人力物力,適于基層單位和食品廠內(nèi)部測定細(xì)菌總數(shù)用.但此法取樣量少,代表性可能受到影響.又食品中細(xì)菌數(shù)少于3000/g（ml）者受到限制.