基因診斷（gene diagnosis）是以探測(cè)基因的存在,分析基因的類(lèi)型和缺陷及其表達(dá)功能是否正常,從而達(dá)到診斷疾病的一種方法.它是繼形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)和免疫學(xué)診斷之后的第四代診斷技術(shù),它的誕生與發(fā)展得益于分子生物學(xué)理論和技術(shù)的迅速發(fā)展.
　　常用基因診斷技術(shù)：
　　一、Southern印跡法（Southern blot）
　　基本原理是：硝酸纖維膜或尼龍濾膜對(duì)單鏈DNA的吸附能力很強(qiáng),當(dāng)電泳后凝膠經(jīng)過(guò)DNA變性處理,覆以上述濾膜,再于其上方壓上多層干燥的吸水紙,借助它對(duì)深鹽溶液的上吸作用,凝膠上的單鏈DNA將轉(zhuǎn)移到濾膜上.轉(zhuǎn)移是原位的,即DNA片段的位置保持不變.轉(zhuǎn)移結(jié)束后,經(jīng)過(guò)80℃烘烤的DNA,將原位地固定于膜上.
　　當(dāng)含有特定基因片段已原位轉(zhuǎn)移到膜上后,即可與同位素標(biāo)記了的探針進(jìn)行雜交,并將雜交的信號(hào)顯示出來(lái).雜交通常在塑料袋中進(jìn)行,袋內(nèi)放置上述雜交濾膜,加入含有變性后探針的雜交溶液后,在一定溫度下讓單鏈探針DNA與固定于膜上的單鏈基因DNA分子按堿基到互補(bǔ)原理充分結(jié)合.結(jié)合是特異的,例如只有β珠蛋白基因DNA才能結(jié)合上β珠蛋白的探針.雜交后,洗去膜上的未組合的探針,將Ⅹ線(xiàn)膠片覆于膜上,在暗盒中日光進(jìn)行放射自顯影.結(jié)合了同位素標(biāo)記探針的DNA片段所在部位將顯示黑色的雜交帶,基因的缺失或突變則可能導(dǎo)致帶的缺失或位置改變.
　　二、聚合酶鏈反應(yīng)
　　近年來(lái),基因分析和基因工程技術(shù)有了革命性的突破,這主要?dú)w功于聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction,PCR）的發(fā)展和應(yīng)用.應(yīng)用PCR技術(shù)可以使特定的基因或DNA片段在短短的2－3小時(shí)內(nèi)體外擴(kuò)增數(shù)十萬(wàn)至百萬(wàn)倍.擴(kuò)增的片段可以直接通過(guò)電泳觀察,也可用于進(jìn)一步的分析.這樣,少量的單拷貝基因不需通過(guò)同位素提高其敏感性來(lái)觀察,而通過(guò)擴(kuò)增至百萬(wàn)倍后直接觀察到,而且原先需要一、二周才能作出的診斷可以縮短至數(shù)小時(shí).
　　三、擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性
　　小衛(wèi)星DNA和微衛(wèi)星DNA的長(zhǎng)度多態(tài)性可以通過(guò)PCR擴(kuò)增后電泳來(lái)檢出,并用于致病基因的連鎖分析,這種診斷方法稱(chēng)為擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性（amplified fragment length polymorphism,Amp-FLP）連鎖分析法.PCR擴(kuò)增后,產(chǎn)物即等位片段之間的差別有時(shí)只有幾個(gè)核苷酸,故需用聚丙烯酰胺凝膠電泳分離鑒定.此法多用于突變性質(zhì)不明的連鎖分析.
　　四、等位基因的特異寡核苷酸探針診斷法
　　當(dāng)基因的突變部位和性質(zhì)已完全明了時(shí),可以合成等基因特異的寡核苷酸探針（allele-specific oligonucleotide,ASO）用同位素或非同位素標(biāo)記進(jìn)行診斷.探針通常為長(zhǎng)20bp左右的核苷酸.用于探測(cè)點(diǎn)突變時(shí)一般需要合成兩種探針,與正?；蛐蛄型耆恢?能與之穩(wěn)定地雜交,但不能與突變基因序列雜交；另一種與突變基因序列一致,能與突變基因序列穩(wěn)定雜交,但不能與正?；蛐蛄蟹€(wěn)定雜交,這樣,就可以把只有一個(gè)堿基發(fā)生了突變的基因區(qū)別開(kāi)來(lái).
　　PCR可結(jié)合ASO,即PCR－ASO技術(shù),即先將含有突變點(diǎn)的基因有關(guān)片段進(jìn)行體外擴(kuò)增,然后再與ASO探針作點(diǎn)雜交,這樣大大簡(jiǎn)化了方法,節(jié)約了時(shí)間,而且只要極少量的基因組DNA就可進(jìn)行.
　　五、單鏈構(gòu)象多態(tài)性診斷法
　　單鏈構(gòu)象多態(tài)性（signle strand conformation polymorphism,SSCP）是指單鏈DNA由于堿基序列的不同可引起構(gòu)象差異,這種差異將造成相同或相近長(zhǎng)度的單鏈DNA電泳遷移率不同,從而可用于DNA中單個(gè)堿基的替代、微小的缺失或手稿的檢測(cè).用SSCP法檢查基因突變時(shí),通常在疑有突變的DNA片段附近設(shè)計(jì)一對(duì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,然后將擴(kuò)增物用甲酰胺等變性,并在聚丙烯酰胺凝膠中電泳,突變所引起的DNA構(gòu)象差異將表現(xiàn)為電泳帶位置的差異,從而可據(jù)之作出診斷.