究其原因,經(jīng)自己多次親手操作,多次反復(fù)對(duì)比,始悟出一些道理,敘述如下：拖尾現(xiàn)象是指展層,顯色后在層析分配圖上,所看到的某一種氨基酸的分子位移,不是如標(biāo)準(zhǔn)圖譜所示的那樣,完整地顯示在某一位置上,而是形成象笤帚似的那樣,前端粗圓而逐漸細(xì)小下來(lái),宛如拖著一個(gè)尾巴.其圖所呈顏色也是由濃漸淡.其圖象的出現(xiàn),原認(rèn)為是在實(shí)驗(yàn)中,對(duì)影響Rf值的主要因素要求,掌握不夠所致.諸如,物質(zhì)結(jié)構(gòu)與極性對(duì)Rf值的影響,層析溶劑對(duì)Rf值的影響,PH對(duì)Rf值的影響(溶劑、濾紙和樣品的PH值),溫度對(duì)Rf值的影響,濾紙的質(zhì)地是否均勻,薄厚是否適當(dāng),纖維的松緊度是否適中等對(duì)Rf值的影響,展層的方式(上行、下行)對(duì)Rf值的影響.然而在多次實(shí)驗(yàn)過(guò)程中無(wú)論怎佯嚴(yán)格遵循其影響Rf值的主要因素的要求,都仍不可避免地要出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象.此時(shí),這就需要從具體操作規(guī)范方面,諸如樣品的處理,點(diǎn)樣、展層、顯色等幾個(gè)操作程序去考慮思索,經(jīng)仔細(xì)分析,樣品的處理是為除去雜質(zhì)純化樣品,達(dá)到層析分配某氨基酸的情晰顯色圖像；展層過(guò)程是在上述影響Rf值的主要因素要求下
進(jìn)行,使樣品達(dá)到一個(gè)適當(dāng)?shù)奈灰?便于在顯色后從圖象上,區(qū)分不同樣品的氨基酸；顯色是在用配制好的,與水不相混合,并揮發(fā)性較快的 邑劑噴霧后迅速吹干的.更何況顯色劑又是含水量極低,不會(huì)影響洋品的斑點(diǎn)擴(kuò)散,那么問(wèn)題就集中在點(diǎn)樣這個(gè)操作程序上了.點(diǎn)樣是將被層析分配的幾種氨基酸混合液,和為了對(duì)照實(shí)驗(yàn)結(jié)果,而分別配制的幾種氨基酸的溶液,用微量點(diǎn)樣管或毛細(xì)管,或血球計(jì)數(shù)器將5一j5微升的樣品,點(diǎn)在以濾紙為惰性支持物的層析紙上設(shè)計(jì)好的多點(diǎn)位置中去.點(diǎn)樣后要自然風(fēng)干,或冷風(fēng)吹干.最好不要用加熱裝置,如吹風(fēng)機(jī),燈泡之類的熱源將其樣品點(diǎn)加速干燥.因?yàn)榧訜嵫b置在學(xué)生操作時(shí),一但注意不夠,掌握不好,則溫度升高勢(shì)必要使樣品破壞,更會(huì)使佯品點(diǎn)干的太燥.正是由于這樣,樣品點(diǎn)太干燥,使其樣品物的分子,牢固地吸牢在層析紙的纖維上.所以在展層過(guò)程中,樣品點(diǎn)的每個(gè)物質(zhì)分子,不能在層析紙上同時(shí)起步,而是形成了有先有后,魚貫而上行或下行的狀況,最終使洋品物質(zhì)的分子,不能同時(shí)都集中到達(dá)一個(gè)位置.致使在顯色后,實(shí)驗(yàn)結(jié)果的圖象上,觀察到的不是一個(gè)完整的斑點(diǎn),而是一個(gè)拖著尾巴的斑點(diǎn).這就是上述所說(shuō)的拖尾現(xiàn)象.
鹵、結(jié)束語(yǔ) ’
紙上分配層析所出現(xiàn)的拖尾現(xiàn)象,究其原因很簡(jiǎn)單,就是在點(diǎn)樣品后,樣品點(diǎn)吹的太干燥所致.原因太簡(jiǎn)單了,往往被人們?nèi)菀缀雎?更引不起人們的重視.但它確實(shí)在困擾著人們的實(shí)驗(yàn)效果.為此,建議應(yīng)在該實(shí)驗(yàn)的點(diǎn)樣操作中,加上一句,“樣品點(diǎn)不要砍的太干燥,否則,樣品物質(zhì)的分子,會(huì)牢吸在層析紙的纖維上,出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象”.
摘自：
1994年 3期《晉東南師專學(xué)報(bào)》：-67-67,95
關(guān)于對(duì)用“紙層析法分離鑒定氨基酸”實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象的分析
趙晉德