1 血要新鮮.如果是凍存的,在解凍時要完全,之后再加Trizol.
2 可以稍多加一些Trizol,少加些血.混勻之后放置10分鐘左右,直接加三氯甲烷,混勻再去離心.
可以不用先離心去沉淀之后再加三氯甲烷.
3 每個步驟操作要快,用的時間藥短些,防止降解
4 異丙醇沉淀的時候,放-20°C的冰箱半個小時,或再適當(dāng)延長一點(diǎn)時間.迅速離心,之后加75%乙醇.只洗一遍,洗2遍易損失部分RNA.
5 不要過分干燥,管內(nèi)稍有點(diǎn)殘余的乙醇也沒關(guān)系.干燥一會就迅速加DEPC水少量.一般我都加的30.如果需要濃度高點(diǎn)可以少加水.
6 提取RNA之后迅速反轉(zhuǎn)錄成cDNA再保存.
RNA直接凍存會降解.也會影響以后反轉(zhuǎn)的效率.