實驗原理：
采用Folin-酚法測定,Folin-酚試劑由甲試劑和乙試劑組成.甲試劑由碳酸鈉,氫氧化鈉,硫酸銅及酒石酸鉀鈉（KNaC4H4O6•4H2O）組成.多肽中的肽鍵在堿性條件下,與酒石酸鉀鈉銅鹽溶液起作用,生成紫紅色絡(luò)合物.乙試劑是由磷鉬酸、磷鎢酸、硫酸和溴等組成.此試劑在堿性條件下,易被多肽中酪氨酸的酚基還原呈藍(lán)色反應(yīng),其色澤深淺與多肽含量成正比[28].
實驗所需試劑的配置：
(1) 試劑甲：(A) ：10g Na2CO3,2g NaOH和0.25g酒石酸鉀鈉（KNaC4H4O6•4H2O）,溶解于500mL去離子水.(B) ：0.5g 硫酸銅（CuSO4•5H2O）溶解于100mL 去離子水中；將50份（A）與1份（B）混合,即為試劑甲.
(2) 試劑乙：將Folin-酚試劑與去離子水按1:1混合.
(3) 標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液：精確稱取結(jié)晶牛血清蛋白,溶于去離子水中,濃度為250μg/mL左右.牛血清蛋白溶于水,若混濁,可改用0.9%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）NaCl溶液.
(4) 樣品溶液：通常根據(jù)樣品中蛋白含量的不同,樣品在測定前需要進(jìn)行適當(dāng)倍數(shù)的稀釋.
實驗步驟：
(1) 標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定:取16支大試管,1支作空白,3只留作未知樣品,其余試管分成兩組,分別加入0,0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 mL標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液（濃度為250μg/mL）.用水補足到1.0 mL,然后每支試管加入5mL試劑甲,在漩渦混合器上迅速混合,于室溫（20-25℃）放置10 min.再向各個試管加入0.5mL試劑乙,同樣立即混合.然后在室溫下放置30 min,以未加蛋白質(zhì)溶液的第一支試管作為空白對照,于700nm處測定各試管中溶液的吸光度值,以蛋白質(zhì)的量為橫坐標(biāo),吸光度值為縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線.
(2) 樣品的測定：取1mL 樣品溶液（其中蛋白質(zhì)含量約20-25μg）,按上述方法進(jìn)行操作,取1mL水代替樣品作為空白對照.