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  • 雙縮脲法與folin酚法測定蛋白含量的準確性的如何?

    雙縮脲法與folin酚法測定蛋白含量的準確性的如何?
    生物人氣:193 ℃時間:2020-03-26 14:15:47
    優(yōu)質(zhì)解答
    folin酚試劑法測定蛋白質(zhì)含量是最靈敏的方法之一.此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的,只是加入了第二種試劑,即Folin—酚試劑,以增加顯色量,從而提高了檢測蛋白質(zhì)的靈敏度.這兩種顯色反應(yīng)產(chǎn)生深藍色的原因是:在堿性條件下,蛋白質(zhì)中的肽鍵與銅結(jié)合生成復合物.Folin—酚試劑中的磷鉬酸鹽—磷鎢酸鹽被蛋白質(zhì)中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原,產(chǎn)生深藍色(鉬蘭和鎢蘭的混合物).在一定的條件下,藍色深度與蛋白的量成正比.
    這個測定法的優(yōu)點是靈敏度高,比雙縮脲法靈敏得多.缺點是費時間較長,要精確控制操作時間,標準曲線也不是嚴格的直線形式,且專一性較差,干擾物質(zhì)較多.對雙縮脲反應(yīng)發(fā)生干擾的離子,同樣容易干擾folin-酚反應(yīng)(Lowry反應(yīng)).
    雙縮脲法是一個用于鑒定蛋白質(zhì)的分析方法.雙縮脲試劑是一個堿性的含銅試液,呈藍色,由1%氫氧化鉀、幾滴1%硫酸銅和酒石酸鉀鈉配制.當?shù)孜镏泻须逆I時(多肽),試液中的銅與多肽配位,配合物呈紫色.可通過比色法分析濃度,在紫外可見光譜中的波長為540nm.鑒定反應(yīng)的靈敏度為5-160mg/ml.
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