在94度時(shí),所有雙鏈都是解離狀態(tài),自由碰撞.由于溫度過高,及時(shí)互補(bǔ)鏈相遇,也無法形成氫鍵.
當(dāng)溫度向55度降低時(shí),互補(bǔ)鏈形成氫鍵的幾率逐漸增大,由于引物的濃度大大超過以擴(kuò)增的互補(bǔ)鏈,所以引物和互補(bǔ)鏈的結(jié)合開始增多,溫度降低到引物的TM溫度時(shí),理論上已經(jīng)有一般的互補(bǔ)鏈已經(jīng)和引物結(jié)合了.降到55度時(shí),結(jié)合基本完成,Taq酶也到位.
溫度升到72度后,Taq獲得最適溫度,活性增高,開始合成新鏈.再次升高溫度時(shí),根據(jù)模板的長短,如果是原始的模板,taq酶還正在合成新鏈,合成被打斷.如果模板是新合成的,比較短,這時(shí)taq已經(jīng)到了新合成連的末端,并且給末端加了個(gè)核苷酸-A.
這個(gè)也就是為什么PCR產(chǎn)物其實(shí)是粘性末端：
XXXXXXXXXXXX-A
A-XXXXXXXXXXXX
上面一條是5‘-3’,下面是互補(bǔ) （示意圖）
PCR反應(yīng)過程中94℃與72℃之間反應(yīng)體系發(fā)生著什么反應(yīng),72℃與55℃之間又發(fā)生著什么反應(yīng)?
PCR反應(yīng)過程中94℃與72℃之間反應(yīng)體系發(fā)生著什么反應(yīng),72℃與55℃之間又發(fā)生著什么反應(yīng)?
生物人氣：158 ℃時(shí)間：2020-05-13 00:37:20
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