關(guān)于熒光實(shí)時(shí)定量PCR
1.一定要在冰上操作嗎?個(gè)人覺得沒有必要啊!
2.一般都使用雙蒸水,使用超純水可以嗎?貌似結(jié)果不怎么樣啊
3.關(guān)于加樣量的體系問題,只要保證引物的終濃度就可以而不用考慮加的量,還是一定要保證體系中引物的量相同?舉個(gè)例子：
引物1F 1R,2F 2R（雙重定量） ,保存的濃度都是20uM,引物1的終濃度應(yīng)為1000nM,引物2的終濃度應(yīng)為500nM,20ul體系,所以加引物1的量是1ul ,引物2的量是0.5ul.
或者可以實(shí)驗(yàn)前先將引物2稀釋為10uM,然后為了達(dá)到終濃度,引物1和引物2加的量就都為1ul.
請(qǐng)問,這兩種方法有區(qū)別嗎?哪種更好呢?