1）你應(yīng)該是沒有明白什么是包涵體,簡(jiǎn)單的說就是翻譯的蛋白沒有正確折疊而聚集在一起形成的,主要的是疏水作用.實(shí)際上就是很多個(gè)蛋白分子,這些蛋白并不是交聯(lián)在一起的,用高濃度的尿素和鹽酸胍可以使他們變性,解聚.
2）用沉淀跑電泳可以確定目的蛋白是否在包涵體?
包涵體是不溶于水的,比較總蛋白.沉淀,及上清中的誘導(dǎo)帶就可以知道上清中有沒有你想要的可溶蛋白了
3）電泳檢測(cè)的話,可以用SDS-PAGE檢測(cè),在上樣之前,需要用上樣緩沖液處理樣品,處理后,包涵體也就解聚了,每個(gè)蛋白分子與SDS結(jié)合,形成了可溶物.
4）質(zhì)量大的話怎么可以用電泳來確定呢?
為什么不可以呢?DNA電泳,蛋白電泳不都可以嗎?
5）電泳的原理就是根據(jù)蛋白質(zhì)量大小來將不同的蛋白分開的呀?
不通種電泳的原理個(gè)不相同.SDS-PAGE可以簡(jiǎn)單的認(rèn)為是根據(jù)蛋白質(zhì)量來區(qū)分蛋白的.
你想不明白應(yīng)該是不知道什么是包涵體,或者什么是電泳,電泳的原理,你自己還是在網(wǎng)上好好看看這些內(nèi)容,應(yīng)該不難理解.
上樣緩沖液中有巰基乙醇,SDS,樣品還要加熱,破壞了包涵體之間蛋白的相互作用力,最好還是看看是怎么行成的包涵體吧