薄層色譜法
薄層色譜法,系將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上,成一均勻薄層.待點(diǎn)樣、展開(kāi)后,與適宜的對(duì)照物按同法所得的色譜圖作對(duì)比,用以進(jìn)行藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測(cè)定的方法.1.儀器與材料 (1) 玻板 除另有規(guī)定外,用5cm×20cm,10cm×20cm或20cm×20cm的規(guī)格,要求光滑、平整,洗凈后不附水珠,晾干.(2) 固定相或載體 最常用的有硅膠G、硅膠GF〈[254]〉 、硅膠H、 硅膠HF〈[254]〉,其次有硅藻土、硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、 微晶纖維素F〈[254]〉等.其顆粒大小,一般要求直徑為10～40μm.薄層涂布,一般可分無(wú)粘合劑和含粘合劑兩種;前者系將固定相直接涂布于玻璃板上,后者系在固定相中加入一定量的粘合劑,一般常用10～15％煅石膏(CaSO4.2H2O在140℃烘4小時(shí)),混勻后加水適量使用,或用羧甲基纖維素鈉水溶液(0.0.7％)適量調(diào)成糊狀,均勻涂布于玻璃板上.也有含一定固定相或緩沖液的薄層.(3) 涂布器 應(yīng)能使固定相或載體在玻璃板上涂成一層符合厚度要求的均勻薄層.(4) 點(diǎn)樣器 同紙色譜法項(xiàng)下.(5) 展開(kāi)室 應(yīng)使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開(kāi)缸,并有嚴(yán)密的蓋子,除另有規(guī)定外,底部應(yīng)平整光滑,應(yīng)便于觀察.2.操作方法 (1) 薄層板制備 除另有規(guī)定外,將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合,去除表面的氣泡后,倒入涂布器中,在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.0.3mm）,取下涂好薄層的玻板,置水平臺(tái)上于室溫下晾干,后在110℃烘30分鐘,即置有干燥劑的干燥箱中備用.使用前檢查其均勻度（可通過(guò)透射光和反射光檢視）.(2) 點(diǎn)樣 除另有規(guī)定外,用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于薄層板上,一般為圓點(diǎn),點(diǎn)樣基線距底邊2.0cm,樣點(diǎn)直徑及點(diǎn)間距離同紙色譜法,點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜.點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面.(3) 展開(kāi) 展開(kāi)室如需預(yù)先用展開(kāi)劑飽和,可在室中加入足夠量的展開(kāi)劑,并在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條,一端浸入展開(kāi)劑中,密封室頂?shù)纳w,使系統(tǒng)平衡或按正文規(guī)定操作.將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開(kāi)室的展開(kāi)劑中,浸入展開(kāi)劑的深度為距薄層板底邊0.1.0cm（切勿將樣點(diǎn)浸入展開(kāi)劑中）,密封室蓋,待展開(kāi)至規(guī)定距離(一般為10～15cm),取出薄層板,晾干,按各品種項(xiàng)下的規(guī)定檢測(cè).(4) 如需用薄層掃描儀對(duì)色譜斑點(diǎn)作掃描檢出,或直接在薄層上對(duì)色譜斑點(diǎn)作掃描定量,則可用薄層掃描法.薄層掃描的方法,除另有規(guī)定外,可根據(jù)各種薄層掃描儀的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及使用說(shuō)明,結(jié)合具體情況,選擇吸收法或熒光法,用雙波長(zhǎng)或單波長(zhǎng)掃描.由于影響薄層掃描結(jié)果的因素很多,故應(yīng)在保證供試品的斑點(diǎn)在一定濃度范圍內(nèi)呈線性的情況下,將供試品與對(duì)照品在同一塊薄層上展開(kāi)后掃描,進(jìn)行比較并計(jì)算定量,以減少誤差.各種供試品,只有得到分離度和重現(xiàn)性好的薄層色譜,才能獲得滿意的結(jié)果.