你用直接提取的dna做模板pcr出來的是他的基因組序列 包括了內(nèi)含子的 但是用總RNA反轉(zhuǎn)錄出來的cdna pcr出來的只有外顯子 是經(jīng)過了轉(zhuǎn)錄后剪切的
主要是看你要用來干什么 如果是要過表達(dá)最好是用總RNA 反轉(zhuǎn)出來的cdna做模板恩，說得對。我設(shè)計(jì)簡并引物的時候用的是CDS序列多序列比對設(shè)計(jì)的簡并引物。這樣子用DNA做模板的話會不會P不出結(jié)果呢？還是提RNA效果好一點(diǎn)是嗎？我是想做表達(dá)，但拿到保守區(qū)后還得3'race,5'race.不知道能走多遠(yuǎn)。唉！有可能P不出東西你拿引物去blast基因組的數(shù)據(jù)庫里面比對下看看為啥要做race 做表達(dá)只要包含了起始密碼子到終止密碼子的部分就可以了 UTR部分不需要
RT-PCR模板選擇問題.
RT-PCR模板選擇問題.
我是準(zhǔn)備設(shè)計(jì)簡并引物擴(kuò)增一個魚類的未知基因的保守區(qū).一些文獻(xiàn)上是提取腦部總RNA,然后反轉(zhuǎn)錄得到第一鏈CDNA,然后用這CDNA做模板擴(kuò)增保守區(qū).但是我老師的想法是直接提取DNA,然后用DNA做模板來擴(kuò)增保守區(qū).請問有經(jīng)驗(yàn)的同學(xué)老師,那種方法好點(diǎn)?各自的有缺點(diǎn)是什么?請不吝賜教.
我是準(zhǔn)備設(shè)計(jì)簡并引物擴(kuò)增一個魚類的未知基因的保守區(qū).一些文獻(xiàn)上是提取腦部總RNA,然后反轉(zhuǎn)錄得到第一鏈CDNA,然后用這CDNA做模板擴(kuò)增保守區(qū).但是我老師的想法是直接提取DNA,然后用DNA做模板來擴(kuò)增保守區(qū).請問有經(jīng)驗(yàn)的同學(xué)老師,那種方法好點(diǎn)?各自的有缺點(diǎn)是什么?請不吝賜教.
其他人氣：181 ℃時間：2020-06-11 07:55:52
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