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  • CTAB法提取植物DNA,液氮研磨后,添加CTAB提取液這步具體怎樣進(jìn)行啊,

    CTAB法提取植物DNA,液氮研磨后,添加CTAB提取液這步具體怎樣進(jìn)行啊,
    是把研缽放進(jìn)65度水浴,等樣品徹底溶解之后,再加CTAB;還是水浴時(shí)沒(méi)等液氮完全揮發(fā),就直接加CTAB啊,(我知道這樣會(huì)結(jié)冰)?加CTAB之后能用研磨棒研磨嗎?因?yàn)榻裉熳鲞@一步時(shí),樣品粉末非常難溶,研磨的時(shí)間用控制在多少時(shí)間呢(聽說(shuō)這時(shí)候的DNA、開始很容易斷裂)?因?yàn)檫@是DNA提取非常關(guān)鍵的一步,請(qǐng)有經(jīng)驗(yàn)的朋友說(shuō)說(shuō),說(shuō)得越具體越好.本人今天做了這個(gè)實(shí)驗(yàn),做得很差,現(xiàn)在比較急,關(guān)于這個(gè)實(shí)驗(yàn)有什么其他要注意的地方請(qǐng)不吝賜教,
    語(yǔ)文人氣:380 ℃時(shí)間:2020-03-31 06:56:14
    優(yōu)質(zhì)解答
    多放一點(diǎn)液氮,磨得時(shí)間適當(dāng)長(zhǎng)一些.如果你的樣品比較多,在液氮還沒(méi)有蒸發(fā)前迅速把粉末轉(zhuǎn)移到EP官管中,然后把它暫時(shí)放到-20的冰箱中,等所有的樣品全部磨好后統(tǒng)一加CTAB.
    你做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候材料最好盡量新鮮一些,嫩一些;磨得時(shí)候材料也不要太多,太多反而不好,CTAB不能裂解這么多材料,同時(shí)雜質(zhì)還比較多.
    你說(shuō)效果不好究竟是怎么回事,可以把膠圖發(fā)過(guò)來(lái)看嗎?跑膠總DNA拖尾比較嚴(yán)重,降解的比較厲害,我的都是干燥樣品的,一般都是取0.3——0.5克這樣,研磨之后,我直接把研缽放在水浴上了。我現(xiàn)在最大的困惑和擔(dān)心就是,是等液氮完全揮發(fā)完,粉末溶解了再加CTAB(但是這樣試劑就結(jié)冰了);還是等液氮揮發(fā)完粉末溶解了再加CTAB(我擔(dān)心粉末凍結(jié)后這段時(shí)間沒(méi)有CTAB中EDTA的保護(hù),DNA的降解比較厲害?)。請(qǐng)問(wèn)后面我的理解正確嗎
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