PCR目的片段為2100BP到3000BP,用哪種酶效果會(huì)好點(diǎn)?
PCR目的片段為2100BP到3000BP,用哪種酶效果會(huì)好點(diǎn)?
還有就是上游引物的TM為48.9,下游引物為53.請(qǐng)問(wèn)退火溫度設(shè)定什么值較好?
還有就是上游引物的TM為48.9,下游引物為53.請(qǐng)問(wèn)退火溫度設(shè)定什么值較好?
數(shù)學(xué)人氣：735 ℃時(shí)間：2020-09-19 01:31:03
優(yōu)質(zhì)解答
引物計(jì)算的Tm值未必適合你的PCR儀,還是要用梯度來(lái)一遍,不過(guò)如果懶得弄,你就用52度P一次也行.置于哪種酶,我一般要是擴(kuò)增2000-3000這個(gè)長(zhǎng)度,就是Taq足矣,我們實(shí)驗(yàn)室的Taq是自己做的,因此圖便宜都用Taq,也沒(méi)見(jiàn)什么不良影響.至于Pfu,保真性高一些,可是擴(kuò)增效率低一點(diǎn),如果你擴(kuò)增這個(gè)片段用于后續(xù)克隆,不能出錯(cuò),Pfu也挺好,但是你如果僅僅是擴(kuò)增這個(gè)片段為了驗(yàn)證什么別的結(jié)果,那么Taq這種便宜量又足的東東,非常合適.
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