大質(zhì)粒(大于15kb) 容易受損,故應(yīng)采用漫和裂解法從細(xì)胞中釋放出來.將細(xì)菌懸于蔗糖等滲溶液中,然后用溶菌酶和EDTA進(jìn)生處理,破壞細(xì)胞壁和細(xì)胞外膜,再加入SDS一類去污劑溶解球形體.這種方法最大限度地減小了從具有正壓的細(xì)菌內(nèi)部把質(zhì)粒釋放出來所需要的作用力.
提取過程中的機(jī)械力可能使大分子DNA斷裂成小片段,所以為保證DNA的完整性,各步操作均應(yīng)較溫和,避免劇烈震蕩.如盡量減少酚/氯仿抽提、混勻過程要輕緩,以保證得到較長的DNA.