測(cè)試步驟：
(一)樣品準(zhǔn)備
1.液體樣品根據(jù)用戶提供的技術(shù)指標(biāo),檢查濃度范圍是否合適,如果需要稀釋,則要考慮所需溶劑類(lèi)型和稀釋倍數(shù).
2.固體樣品均勻粉末、片狀或具有光滑平面的塊狀樣品,均可直接測(cè)定.
(二)操作步驟
1.開(kāi)機(jī)：接通電源,打開(kāi)主機(jī)開(kāi)關(guān),點(diǎn)燃(打開(kāi))光源后,根據(jù)說(shuō)明書(shū)要求啟動(dòng)計(jì)算機(jī).
2.檢測(cè)前準(zhǔn)備：參照儀器說(shuō)明書(shū),在20天內(nèi)至少進(jìn)行一次激發(fā)校準(zhǔn)和發(fā)射校準(zhǔn),檢測(cè)前儀器應(yīng)預(yù)熱.
3.工作條件的選擇：環(huán)境溫度應(yīng)在20℃±5℃;相對(duì)濕度不大于70%;電源穩(wěn)定,無(wú)磁場(chǎng)、電場(chǎng)干擾.根據(jù)樣品的特性及熒光強(qiáng)度,選擇合適的儀器工作條件(如狹縫、PM增益、響應(yīng)時(shí)間等).
4.基本測(cè)定
(1)熒光激發(fā)光譜測(cè)定
設(shè)置儀器參數(shù),掃描發(fā)射波長(zhǎng),找到maxλem,以此為發(fā)射波長(zhǎng),記錄發(fā)射強(qiáng)度作為激發(fā)波長(zhǎng)的函數(shù),便得到激發(fā)光譜.
(2)熒光發(fā)射光譜測(cè)定
設(shè)置儀器參數(shù),掃描激發(fā)波長(zhǎng),找到maxλex,以此為激發(fā)波長(zhǎng),記錄發(fā)射強(qiáng)度與發(fā)射波長(zhǎng)間的函數(shù)關(guān)系,便得到熒光發(fā)射光譜.
(3)差譜測(cè)定
設(shè)置儀器參數(shù),選擇合適的工作方式,測(cè)定背景溶液的發(fā)射光譜并儲(chǔ)存起來(lái),在一定的工作方式下,掃描樣品溶液的發(fā)射波長(zhǎng),得到當(dāng)時(shí)的光度值和儲(chǔ)存的背景值之間的差示值,即差譜.
(4)峰面積積分
選擇適當(dāng)?shù)墓ぷ鞣绞?對(duì)樣品溶液進(jìn)行積分操作,即得到峰面積積分.
(5)熒光強(qiáng)度
選擇合適的測(cè)量參數(shù),設(shè)置λex、λem,采用定點(diǎn)讀數(shù)或掃描方式,即可測(cè)得所選波長(zhǎng)處的熒光強(qiáng)度.
(6)定量測(cè)定
配制一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液,在一定的測(cè)定條件下,設(shè)置λex、λem,按照由稀至濃的次序,測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度,繪制熒光強(qiáng)度—濃度的工作曲線,不改變儀器參數(shù)測(cè)定未知溶液的熒光強(qiáng)度,由工作曲線即可求出未知溶液的濃度.
(三)分析結(jié)果的表述
1.熒光激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及其他光譜由儀器控制電腦直接繪出.
2.峰面積積分、熒光強(qiáng)度由儀器控制電腦計(jì)算顯示.
3.定量測(cè)試：在相同的測(cè)定條件下,測(cè)定一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度,繪制出熒光強(qiáng)度-濃度的工作曲線.濃度未知的溶液的熒光強(qiáng)度測(cè)定后,由工作曲線求出該溶液的濃度.
(四)注意事項(xiàng)
1.在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,應(yīng)提前打開(kāi)儀器預(yù)熱,并配制好所需的溶液,對(duì)于已經(jīng)配制好的溶液,在不用時(shí)放在4℃冰箱中保存,放置時(shí)間超過(guò)一星期的溶液要重新配制.
2.實(shí)驗(yàn)所用的樣品池是四面透光的石英池,拿取的時(shí)候用手指掐住池體的上角部,不能接觸到四個(gè)面,清洗樣品池后應(yīng)用擦鏡紙對(duì)其四個(gè)面進(jìn)行輕輕擦拭.
3.在測(cè)試樣品時(shí),注意熒光強(qiáng)度范圍的設(shè)定不要太高,以免測(cè)得的熒光強(qiáng)度超過(guò)儀器的測(cè)定上限.
4.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,要及時(shí)的清理臺(tái)面,處理廢液,清洗和放置好樣品池,將下次要用的溶液放回冰箱,并且按規(guī)定登記實(shí)驗(yàn)記錄,養(yǎng)成良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣.多謝樓主詳細(xì)的回答，收益了！今天第一次用了熒光分光光度計(jì)，但是我測(cè)試的樣品在文獻(xiàn)中沒(méi)有查到有用熒光分光光度計(jì)來(lái)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的，全部都是紫外分光光度計(jì)，像這樣的情況紫外分光光度計(jì)所給出的一些數(shù)據(jù)對(duì)熒光分光光度計(jì)有什么指導(dǎo)意義嗎？