具體要看你做什么實(shí)驗(yàn),模板和擴(kuò)增的基因?qū)嵲鯓拥?
1、擴(kuò)增曲線：一般來說如果你做雙ΔCT法那么你的擴(kuò)增曲線必須是S型,有明顯的四個(gè)時(shí)期,且復(fù)孔的CT值盡量一致,相差不要超過0.5個(gè)CT值（上限是1個(gè)CT值）；同一個(gè)基因在不同濃度的相同模板下擴(kuò)增,其相差的CT值為相差濃度倍數(shù)的2次開方.比如同一種CDNA5倍濃度稀釋,那么同一種基因擴(kuò)增的前提下,5倍濃度模板的CT值會(huì)比1倍濃度模板的CT值提前2.3個(gè)循環(huán)左右,以此類推,當(dāng)然這是理論值；另外陰性對(duì)照不能有擴(kuò)增（40個(gè)循環(huán)以后出CT值屬正常現(xiàn)象,也可算作沒有擴(kuò)增）.
2、溶解曲線：溶解曲線是判斷擴(kuò)增產(chǎn)物是否單一的曲線,顧名思義,其跟模板（或其濃度）沒有關(guān)系,擴(kuò)增什么基因就應(yīng)該有其相對(duì)應(yīng)的溶解曲線,類似于電泳.那么你擴(kuò)增幾種基因就應(yīng)該有幾種對(duì)應(yīng)的峰（一般SYBR法的目的基因在80~90℃之間）,我說的是一般情況,這個(gè)跟擴(kuò)增片段長短有關(guān)系.出現(xiàn)其他峰就該考慮是否為引物二聚體（一般為60~75℃之間）視引物長度而定,而基因組DNA污染的峰會(huì)在90℃以后.出現(xiàn)引物二聚體可能是引物設(shè)計(jì)、引物加量等原因（也有可能是從加完反應(yīng)液到上機(jī)開始PCR這之間的時(shí)間過長）所致；基因組DNA那么考慮設(shè)計(jì)跨內(nèi)含子引物或者實(shí)驗(yàn)之前做gDNA的消除工作.而陰性對(duì)照有目的峰那可能就是模板污染,注意實(shí)驗(yàn)操作等避免模板污染.
純手打,支持下.