用Syber Green方法做完P(guān)CR后,用來(lái)判斷產(chǎn)物是否相對(duì)專(zhuān)一.反應(yīng)結(jié)束后,逐漸加溫.和Syber Green分子結(jié)合的PCR產(chǎn)物隨溫度升高逐漸變?yōu)閱捂?就不能在和Syber Green結(jié)合.一般每加溫一度,讀一次信號(hào).當(dāng)溫度到達(dá)PCR產(chǎn)物的Tm時(shí),產(chǎn)物解離一下增多.曲線的橫坐標(biāo)是溫度,而縱坐標(biāo)是熒光信號(hào)的變化!開(kāi)始加熱,信號(hào)變化不大,所以幾乎是平的,接近Tm時(shí),突然變化加大,所以出現(xiàn)峰值.再升溫,產(chǎn)物全部解離,就又是一條直線了.
如果有非特異性產(chǎn)物,在加熱過(guò)程中就會(huì)出現(xiàn)一些比較矮,寬的峰.