DNA一般以雙鏈的形式存在,而且雙鏈的比單鏈的穩(wěn)定.
DNA的復(fù)制需要雙鏈打開,同樣,PCR擴增也需要單鏈的模板,所以就有了PCR引物這個東西,引物簡單來說就是一引路的,告訴聚合酶“吶,就從這里開始”.PCR的基本過程包括變性、退火和延伸.DNA的雙鏈主要是靠氫鍵聯(lián)系在一起,高溫時,氫鍵很容易就被斷開了,雙鏈變成了單鏈,提供了PCR的模板.當(dāng)然解旋酶也可以做到斷裂氫鍵,尚且不考慮溫度,我只需考慮 1.酶活,酶活是有限的,如果酶量不足,是否會影響到最終的產(chǎn)量,酶都不便宜.2.PCR需要引物,如果使用解旋酶,是否會把引物從模板上裂解下來?
熱變性DNA一般經(jīng)緩慢冷卻后即可復(fù)性,簡單來說,復(fù)性不就是兩條互補的單鏈變成雙鏈嗎,所以根據(jù)這個特性,完全可以在DNA聚合酶的作用下把已經(jīng)和引物結(jié)合在一起的模板鏈復(fù)制出來.所以,pcr必然有有一個溫度變化的過程.一般來說DNA在高溫中容易變性,這就決定了使用的聚合酶必須是耐高溫的.