電轉(zhuǎn)液中SDS增加蛋白的水溶性,促進蛋白在電轉(zhuǎn)液中泳動.若不加SDS,蛋白會沉淀在膠上,但SDS過多會影響蛋白與膜的吸附.甲醇能使SDS與蛋白分離,甲醇濃度越高SDS與蛋白分離越快,但高濃度的甲醇對蛋白會有固定作用,不利于蛋白從膠里跑出來.一般來說甲醇的濃度為20%,但PVDF膜截留marker上交聯(lián)的小分子顏料的能力很差,可考慮提升甲醇的濃度至25%（它對普通蛋白的轉(zhuǎn)膜影響不太,顏料截留更多）；大蛋白轉(zhuǎn)印可考慮降低甲醇濃度,另外SDS必須添加.甲醇的另一個作用是降溫,舊的電轉(zhuǎn)液由于電解質(zhì)的消耗和甲醇的揮發(fā),電轉(zhuǎn)時電流或電壓變化更快、溫度升高也更快,因此可考慮增加額外的甲醇；這點對半干轉(zhuǎn)緩沖液的意義較大,因為半干轉(zhuǎn)緩沖液消耗很慢,緩沖液放置的時間較久,甲醇揮發(fā)比較嚴(yán)重,可臨時少量補加.