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  • 快速鑒別動(dòng)物dna的詳細(xì)辦法與步驟

    快速鑒別動(dòng)物dna的詳細(xì)辦法與步驟
    生物人氣:397 ℃時(shí)間:2020-04-14 03:56:43
    優(yōu)質(zhì)解答
    DNA的鑒定一般用兩種試劑:甲基綠和二苯胺
    甲基綠—哌洛寧對(duì)DNA和RNA有選擇性的染色效果.堿性的甲基綠-哌洛寧混合染料處理細(xì)胞后,由于DNA、RNA對(duì)染料具有的親和力不同, 而使這兩種染料對(duì)兩類(lèi)核酸具有了選擇性. DNA被甲基綠染成綠色,RNA被哌洛寧染成紅色, 這樣就能使細(xì)胞中兩種核酸分布顯示出來(lái).
    二苯胺法的原理是:DNA中嘌呤核苷酸上的脫氧核糖遇酸生成ω-羥基-γ酮基戊醛,它再和二苯胺作用而顯現(xiàn)藍(lán)色(溶液呈淺藍(lán)色).
    至于步驟,我以雞為例,簡(jiǎn)單說(shuō)下吧
    (1)應(yīng)用低滲原理和機(jī)械攪拌使細(xì)胞破裂并過(guò)濾.本步驟直接決定提取的核物質(zhì)的多少及實(shí)驗(yàn)結(jié)果.教師應(yīng)給予非常關(guān)注.
    (2)溶解細(xì)胞核內(nèi)DNA.加2 mol/L的NaCl溶液并用玻棒攪拌.
    (3)析出DNA黏稠物并過(guò)濾.關(guān)鍵步驟:注意①注蒸餾水要慢,防過(guò)量而使DNA重新溶解(把握濃度達(dá)0.14 mol/L).②輕輕沿同一方向攪拌,有利于DNA析出、附著、纏繞.
    (4)再溶解DNA黏稠物并過(guò)濾.用濃度為2 mol/L的NaCl溶液.
    (5)提取含雜質(zhì)較少的DNA.用預(yù)冷的95%的酒精.因其①可抑制核酸水解酶活性,防止降解.②降低分子運(yùn)動(dòng),易析出沉淀.③低溫利于增加DNA柔韌性,減少斷裂
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