1、采用間接法測定桔梗多糖的含量.運(yùn)用蒽酮-硫酸法測定桔?？偺?包括多糖和還原性的單糖)的含量,分別采用3,5-二硝基水楊酸法(DNS)、間接碘
量法、菲林滴定法測定還原糖的含量.總糖含量與還原糖含量之差即為多糖的含量.三種方法測得的桔梗多糖的含量分別為95.55%、96.01%、
95.75%.結(jié)果顯示三種方法測得的值相近,但是綜合實(shí)驗(yàn)成本、設(shè)備、操作及影響測定的因素等多方面考慮,選用蒽酮-硫酸法與DNS法相結(jié)合測定桔梗多
糖的含量.
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2、采用傳統(tǒng)的水煮醇沉法提取桔梗多糖,分別考察了提取溫度、提取時(shí)間、料液比、提取次數(shù)對桔梗多糖提取率的影響,在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上采用了四因素三水
平正交試驗(yàn)來優(yōu)化桔梗多糖的提取工藝.正交試驗(yàn)結(jié)果表明,桔梗多糖提取的最佳工藝條件為：提取溫度為80℃,提取時(shí)間為2h,提取次數(shù)為2次,料液比為
1：25.通過3次平行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)得出在該方案下桔梗多糖的提取率為42.51%.
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3、采用Sevag法、三氯乙酸法、三氯乙酸-正丁醇法3種方法分別對桔梗多糖進(jìn)行脫蛋白研究,以蛋白脫除率和多糖損失率為衡量指標(biāo),結(jié)果顯示Sevag
法除蛋白效果較好,其工藝條件為：多糖：氯仿：正丁醇=25：5：1,劇烈振搖20min.脫色方法采用H2O2氧化法,脫色條件為：多糖
液：H2O2=4：1,以濃氨水或0.1%NaOH調(diào)pH值為8.8,37℃保溫12h.采用Sephadex G-25柱層析法脫鹽及小分子物質(zhì).
\x094、純化后的桔梗多糖采用DEAE-纖維素52進(jìn)行分離主要得到三種組分：PGPN、PGPA1、PGPA3.三種組分經(jīng)過Sephadex
G-100柱層析進(jìn)一步分離后均得到單一對稱的洗脫峰.利用Sephadex
G-100柱層析、旋光度測定法、紫外分光光度法對三種多糖進(jìn)行純度鑒定得出三種多糖都為均一的多糖,且都不含蛋白質(zhì)和核酸.利用Sephadex
G-200柱層析測得三種多糖的分子量分別為10233、4677、23442.
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5、采用薄層色譜法(TLC)對桔梗多糖的單糖組成進(jìn)行了分析,TLC圖譜顯示PGPN的單糖組成中含有果糖,還含有葡萄糖和半乳糖中的一種或者兩種皆
有；PGPA1是由半乳糖和果糖組成的；PGPA3是由半乳糖和木糖組成的.IR光譜顯示PGPN的單糖是由呋喃糖和吡喃糖共同組成的；PGPA1的單糖
也是由呋喃糖和吡喃糖共同組成的；PGPA3的單糖是由吡喃糖組成的,糖苷鍵類型為α-型,可能含有β-型糖苷鍵.1H-NMR圖譜顯示PGPN的糖苷鍵
類型均為α-型,PGPA1糖苷鍵類型均為β-型；PGPA3的糖苷鍵類型既有α型也有β型.