膠原蛋白的測定方法和原理 或者說下下面這個(gè)實(shí)驗(yàn)叫什么方法 和它的原理
5.1 藥品配制
5.1.1 硫酸溶液[c(H2SO4)≈3 mol/L]
\x05量取750 mL水于2 L的容量瓶中,在攪拌下緩慢加入320 mL濃硫酸（）.冷卻至室溫后用水定容.
5.1.2 緩沖溶液（pH=6.8）
將26.0 g一水檸檬酸、14.0 g氫氧化鈉和78.0 g無水乙酸鈉用500 mL水溶解,轉(zhuǎn)入1 L容量瓶,加入250 mL正丙醇,用水定容.該溶液于4 ℃暗處可穩(wěn)定保存幾周.
5.1.3 氯胺T溶液
稱取1.41 g三水N-氯-對甲苯磺酰胺鈉鹽（氯胺T）,用100 mL緩沖溶液溶解,臨用前配制.
5.1.4 顯色劑
稱取10.0 g對二甲氨基苯甲醛,用35 mL高氯酸溶液（質(zhì)量分?jǐn)?shù)60%）溶解,緩慢加入65 mL異丙醇.臨用前配制.
5.1.5 羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液
\x05標(biāo)準(zhǔn)儲備液：稱取50 mg 4-羥基-α-吡咯甲酸（羥脯氨酸）于100 mL 容量瓶中,用水溶解,加一滴硫酸溶液,用水定容.該溶液4 ℃下可穩(wěn)定存放1個(gè)月.
\x05標(biāo)準(zhǔn)工作液：移取5.00 mL上述標(biāo)準(zhǔn)儲備液至500 mL容量瓶中,用水定容.分別吸取該溶液10、20、30和40 mL于100 mL容量瓶中,用水定容,所得標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度依次為0.5、1.0、1.5和2.0 .臨用前配制.
5.2
5.2.1 樣品前處理
\x05將魚皮流水解凍,去除多余碎肉及脂肪,清洗干凈,吸油紙吸去表面水分,剪碎.
5.2.2 樣品水解
\x05精確稱取4 g魚皮放入燒瓶中,避免粘在燒瓶壁上,加入30 mL硫酸溶液,用表面皿蓋住,在105 ℃干燥箱內(nèi)恒溫16 h.
\x05用圓形濾紙趁熱將水解產(chǎn)物過濾至250 mL容量瓶中,用10 mL硫酸溶液分三次洗滌燒瓶和濾紙,合并至上述容量瓶,用水定容,搖勻.用移液管移取10 mL該水解液至250 mL容量瓶中,定容搖勻.
5.2.3 測定
\x05移取4.00 mL上述溶液于比色管中,加入2.00 mL氯胺T試劑,混合后于室溫下放置20 min.
\x05加入2.00 mL顯色劑于比色管中,充分混合,用塑料薄膜將比色管封口,迅速放入60 ℃水浴中加熱20 min.
\x05取出比色管,流水冷卻比色管至少3 min,室溫下放置30 min.
\x05用水做參比,于558 nm處測吸光值.平行兩組.
\x05用蒸餾水代替稀釋溶液做對照實(shí)驗(yàn).
5.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線
\x05用4.00 mL羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)工作液一次代替稀釋后的水解產(chǎn)物,進(jìn)行同樣操作；
\x05以扣除了空白吸光值的標(biāo)準(zhǔn)工作液的吸光度為縱坐標(biāo),以相應(yīng)的濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.