一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟,具體操作方法是：1）涂片固定.2）草酸銨結晶紫染1分鐘.3）自來水沖洗.4）加碘液覆蓋涂面染約1分鐘.5）水洗,用吸水紙吸去水分.6）加95%酒精數(shù)滴,并輕輕搖動進行脫色,20秒后水洗,吸去水分.7）蕃紅染色液（稀）染1分鐘后,自來水沖洗.干燥,鏡檢.
具體試驗 流程
1、 取載玻片用紗布擦干,載玻片的一面用marker筆畫一個小圈（用來大致確定菌液滴的位置）.涂菌的部位在火焰上烤一下,除去油脂.2、 涂片：液體培養(yǎng)基：左手持菌液試管,在酒精燈火焰附近5cm左右打開管蓋；右手持接種環(huán)在火焰中燒灼滅菌,等冷卻后從試管中沾取菌液一環(huán),在潔凈無脂的載玻片上涂直徑2mm左右的涂膜,最后將接種環(huán)在火焰上燒灼滅菌.固體培養(yǎng)基：先在載玻片上滴一滴無菌水,再用接種環(huán)取少量菌體,涂在載玻片上,使其薄而均勻.3、 晾干：讓涂片在空氣中自然干燥.4、 固定：讓菌膜朝上,通過火焰2-3次固定（以不燙手為宜）.5、 染色：將固定過的涂片放報紙上,滴加草酸銨結晶紫液,染1min.6、 水洗：用水緩慢沖洗涂片上的染色液,用吸水紙吸干.簡單染色結束可觀察細胞形態(tài). 7、 媒染：滴加1滴碘液,染1min,水洗. 8、 脫色：吸去殘留水,連續(xù)滴加95%乙醇脫色20-30s至流出液無紫色,立即水洗. 9、 復染：滴加蕃紅復染3-5min,水洗.至此,革蘭氏染色結束.


結果：革蘭氏陽性菌呈藍紫色,革蘭氏陰性菌呈紅色.


其重要的臨床意義在于：1.鑒別細菌 2.選擇藥物 3.與致病性有關：革蘭氏陽性菌能產生外毒素,革蘭氏陰性菌能產生內毒素；而內毒素主要是指革蘭氏陰性菌胞壁成分中的脂多糖,兩者的致病作用不同.