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  • 不經(jīng)復(fù)染這一步能否區(qū)分革蘭氏陽性菌和陰性菌

    不經(jīng)復(fù)染這一步能否區(qū)分革蘭氏陽性菌和陰性菌
    其他人氣:557 ℃時(shí)間:2020-06-22 03:57:21
    優(yōu)質(zhì)解答
    不能,要經(jīng)過復(fù)染才會(huì)重新上色,然后通過上色的情況來判斷是革蘭氏陰性還是陽性.
    另外再給你一個(gè)革蘭氏染色的步驟和原理,
    革蘭氏染色
    一、\x09目的:在細(xì)胞發(fā)放之前,利用標(biāo)準(zhǔn)的革蘭氏染色法對(duì)即將發(fā)放的細(xì)胞懸液進(jìn)行檢測(cè),判斷細(xì)胞懸液中是否含有革蘭氏陽性菌或革蘭氏陰性菌.
    二、\x09原理:
    通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后,在細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物,革蘭氏陽性菌由于其細(xì)胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密,故遇乙醇脫色處理時(shí),因失水反而使網(wǎng)孔縮小,再加上它不含類脂,故乙醇處理不會(huì)出現(xiàn)縫隙,因此能把結(jié)晶紫與碘復(fù)合物牢牢留在壁內(nèi),使其仍呈紫色;而革蘭氏陰性菌因其細(xì)胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差,在遇脫色劑后,以類脂為主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘復(fù)合物的溶出,因此通過乙醇脫色后仍呈無色,再經(jīng)沙黃等紅色染料復(fù)染,就使革蘭氏陰性菌呈紅色.
    三、實(shí)驗(yàn)用品準(zhǔn)備:
    滅菌玻片、10-100ul移液器、10-100ul滅菌移液吸頭、100ul-1000ul移液器、100ul-1000ul移液吸頭、接種環(huán)、酒精燈、打火機(jī)、革蘭氏染色液、吸水紙、顯微鏡、香柏油、擦鏡紙、計(jì)時(shí)器
    四、\x09操作:
    1 涂片:取滅過菌的載玻片于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,用移液槍吸取10ul待檢樣品滴在載玻片的中央,用燒紅冷卻后的接種環(huán)將液滴涂布成一均勻的薄層,涂布面不宜過大.
    2 干燥:將標(biāo)本面向上,手持載玻片一端的兩側(cè),小心地在酒精燈上高處微微加熱,使水分蒸發(fā),但切勿緊靠火焰或加熱時(shí)間過長,以防標(biāo)本烤枯而變形.
    3 固定:固定常常利用高溫,手持載玻片的一端,標(biāo)本向上,在酒精燈火焰處盡快的來回通過2-3次,共約2-3秒種,并不時(shí)以載玻片背面加熱觸及皮膚,不覺過燙為宜(不超過60℃),放置待冷后,進(jìn)行染色.
    4 初染:在涂片薄膜上滴加草酸銨結(jié)晶紫1-2滴,使染色液覆蓋涂片,染色約1min.
    5 水洗:斜置載玻片,在自來水龍頭下用小股水流沖洗,直至洗下的水呈無色為止.
    6 媒染:用100-1000ul移液槍吸取約300ul碘液滴在涂片薄膜上,使染色液覆蓋涂片,染色約1min.
    7 水洗:斜置載玻片,在自來水龍頭下用小股水流沖洗,直至洗下的水呈無色為止.
    8 脫色:斜置載玻片,滴加95%乙醇脫色,至流出的乙醇不現(xiàn)紫色為止,大約需時(shí)20-30S,隨即水洗.
    9 復(fù)染:在涂片薄膜上滴加沙黃染液1-2滴,使染色液覆蓋涂片,染色約1min.
    10 水洗:斜置載玻片,在自來水龍頭下用小股水流沖洗,直至洗下的水呈無色為止.
    11 干燥、觀察:用吸水紙吸掉水滴,待標(biāo)本片干后置顯微鏡下,用低倍鏡觀察,發(fā)現(xiàn)目的物后滴一滴浸油在玻片上,用油鏡觀察細(xì)菌的形態(tài)及顏色,紫色的是革蘭氏陽性菌,紅色的是革蘭氏陰性菌.
    五、\x09清場(chǎng):
    1.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,將顯微鏡油鏡上的殘留的香柏油用擦鏡紙輕輕擦去,將載物臺(tái)移至最底處,將燈光調(diào)到最暗并將其關(guān)閉電源,拔下電源插頭,罩上防塵罩.
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