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  • PCR擴(kuò)增退火溫度確定

    PCR擴(kuò)增退火溫度確定
    引物F:SIZE:20 TM56.9 %GC:55
    引物R:size:29 TM67 %GC:55
    根據(jù)TM=4*(G+C)+2(A+T)-5它的退火溫度是多少?
    本人小菜鳥一枚,請(qǐng)教高手,主要是不懂從訂單上怎么確定G+C及A+T的含量?
    我知道有軟件可以計(jì)算,我只是想搞搞清楚根據(jù)上面的公式怎么算?還有從哪里得知G+C及A+T的含量?是訂單上給的%GC就是G+C的值嗎?還有A+T的含量怎么計(jì)算?
    其他人氣:387 ℃時(shí)間:2020-05-27 00:37:04
    優(yōu)質(zhì)解答
    計(jì)算退火溫度的方法:
    1. 退火溫度=4×(G+C)+2×(A+T)-(5~8) 只是粗算,有時(shí)不靈,但比較簡(jiǎn)便.
    2.用primer5(or oligo6)計(jì)算,引物配對(duì)好后,primer5可以顯示Tm,我認(rèn)為這個(gè)值就是退火溫度,我的經(jīng)驗(yàn)再加2 or 3度最好.
    3.合成引物的單子上也有個(gè)Tm,減去5~8也可,但有些公司提供的Tm就是方法1計(jì)算的.不好意思,我真的是新手,想問(wèn)一下訂單上給的%gc代表什么意思,謝謝訂單上給的%GC就是G+C的值不好意思,還有這個(gè)是什么意思
    TasI(Tsp5091) A (297+30)T (327) 前面是酶的編號(hào)后面是A的跑帶時(shí)的區(qū)段嗎?為什么是兩個(gè)值?謝謝是,兩個(gè)值的原因不清楚
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