cDNA 文庫是指某生物某發(fā)育時期所轉(zhuǎn)錄的全部 mRNA 經(jīng)反轉(zhuǎn)錄形成的 cDNA 片段與某種載體連接而形成的克隆的集合.經(jīng)典 cDNA 文庫構(gòu)建的基本原理是用 Oligo(dT) 作逆轉(zhuǎn)錄引物,或者用隨機(jī)引物,給所合成的 cDNA 加上適當(dāng)?shù)倪B接接頭,連接到適當(dāng)?shù)妮d體中獲得文庫.其基本步驟包括：RNA 的提取(例如異硫氰酸胍法,鹽酸胍—有機(jī)溶劑法,熱酚法等等,提取方法的選擇主要根據(jù)不同的樣品而定),要構(gòu)建一個高質(zhì)量的 cDNA 文庫,獲得高質(zhì)量的 mRNA 是至關(guān)重要的,所以處理 mRNA 樣品時必須仔細(xì)小心.由于 RNA 酶存在所有的生物中,并且能抵抗諸如煮沸這樣的物理環(huán)境,因此建立一個無 RNA 酶的環(huán)境對于制備優(yōu)質(zhì) RNA 很重要.在獲得高質(zhì)量的 mRNA 后,用反轉(zhuǎn)錄酶 Oligo(dT) 引導(dǎo)下合成 cDNA 第1鏈, cDNA 第2鏈的合成(用 RNA 酶 H 和大腸桿菌 DNA 聚合酶 I,同時包括使用 T4 噬菌體多核苷酸酶和大腸桿菌 DNA 連接酶進(jìn)行的修復(fù)反應(yīng)),合成接頭的加入、將雙鏈 DNA 克隆到載體中去、分析 cDNA 插入片斷,擴(kuò)增 cDNA 文庫、對建立的 cDNA 文庫進(jìn)行鑒定.這里強(qiáng)調(diào)的是對載體的選擇,常規(guī)用的是 λ 噬菌體,這是因?yàn)?λ DNA 兩端具有由12個核苷酸的粘性末端,可用來構(gòu)建柯斯質(zhì)粒,這種質(zhì)粒能容納大片段的外源 DNA.