cDNA文庫(kù)不同于基因組文庫(kù),被克隆DNA是從mRNA反轉(zhuǎn)錄來(lái)源的DNA.cDNA組成特點(diǎn)是其中不含有內(nèi)含子和其他調(diào)控序列.
cDNA文庫(kù)
以mRNA為模板,經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶催化,在體外反轉(zhuǎn)錄成cDNA,與適當(dāng)?shù)妮d體常用噬菌體或質(zhì)粒載體連接后轉(zhuǎn)化受體菌,則每個(gè)細(xì)菌含有一段cDNA,并能繁殖擴(kuò)增,這樣包含著細(xì)胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合稱(chēng)為該組織細(xì)胞的cDNA文庫(kù).基因組含有的基因在特定的組織細(xì)胞中只有一部分表達(dá),而且處在不同環(huán)境條件、不同分化時(shí)期的細(xì)胞其基因表達(dá)的種類(lèi)和強(qiáng)度也不盡相同,所以cDNA文庫(kù)具有組織細(xì)胞特異性.cDNA文庫(kù)顯然比基因組DNA文庫(kù)小得多,能夠比較容易從中篩選克隆得到細(xì)胞特異表達(dá)的基因.但對(duì)真核細(xì)胞來(lái)說(shuō),從基因組DNA文庫(kù)獲得的基因與從cDNA文庫(kù)獲得的不同,基因組.DNA文庫(kù)所含的是帶有內(nèi)含子和外顯子的基因組基因,而從cDNA文庫(kù)中獲得的是已經(jīng)過(guò)剪接、去除了內(nèi)含子的cDNA
基因組文庫(kù)
用限制性?xún)?nèi)切酶切割細(xì)胞的整個(gè)基因組DNA,可以得到大量的基因組DNA片段,然后將這些DNA片段與載體連接,再轉(zhuǎn)化到細(xì)菌中去,讓宿主菌長(zhǎng)成克隆.這樣,一個(gè)克隆內(nèi)的每個(gè)細(xì)胞的載體上都包含有特定的基因組DNA片段,整個(gè)克隆群體就包含基因組的全部基因片段總和稱(chēng)為基因組文庫(kù).
將某種生物的基因組DNA切割成一定大小的片段,并與合適的載體重組后導(dǎo)入宿主細(xì)胞進(jìn)行克隆.這些存在于所有重組體內(nèi)的基因組DNA片段的集合,即基因組文庫(kù),它包含了該生物的所有基因.