1）．脫脂肝粉制備:將新鮮動(dòng)物肝臟切成碎塊、攪碎、充分勻漿,然后加入丙酮后離心,收集沉淀,干燥.然后將肝粉顆粒研磨、過篩、收集細(xì)粉,加入三氯甲烷充分?jǐn)嚢?抽濾,重復(fù)兩次,收集濾餅、干燥.
2）．酶粗品制備:將肝粉用氨水溶液恒溫抽提兩次,合并濾液.將所得水溶液用乙酸溶液酸化、離心,收集上清液.然后調(diào)PH至中性,用硫酸銨初次鹽析、離心、收集上清,再次鹽析、收集沉淀,得酯酶粗品.
3）．精制：將粗品用磷酸鹽緩沖液溶解后,經(jīng)過陰、陽(yáng)離子交換層析柱純化,接收主峰,濃縮,然后再經(jīng)過凝膠層析柱分離,接收主產(chǎn)物峰.
4）超濾、濃縮、凍干.將收集的溶液用微孔濾膜預(yù)過濾后,超濾、濃縮、凍干.