DNA跑瓊脂糖電泳,為什么第一次跑和第二次跑的結(jié)果不一樣?
給細胞加藥后DNA會斷裂成片段,將正常細胞和加藥細胞提出DNA后跑電泳,理論結(jié)果是加藥DNA跑電泳會有明顯拖尾,正常DNA只有15000的一個清晰條帶.我將兩種細胞提出DNA后跑電泳,第一次跑出來的結(jié)果和理論結(jié)果一致,樣品我沒有扔,繼續(xù)跑第二次電泳,但結(jié)果就很混亂：加藥DNA不拖尾；正常DNA反而有一點拖尾,不過不明顯；而且第二次電泳條帶沒有第一次的亮.我又跑了第三次電泳,結(jié)果和第二次一樣.于是我又重復提DNA,后來跑的電泳和原來的一樣,第一次跑出來的結(jié)果和理論結(jié)果一致,第二、第三次的就不是理論值了,但第二和第三次跑的結(jié)果是一樣的.
我確實是反復凍融DNA,我一直以為是DNA在TE里沒有混合均勻呢~電泳前我會解凍DNA,期間大概一個小時DNA是暴露在室溫中的,跑完電泳我就把它凍起來了,然后又解凍~DNA真的是被降解了嗎?我回去試試您的方法吧~
還想問個問題,怎樣才能把DNA提得純一點呢?我提的是HePG-2細胞~教我教我~